【摘 要】
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目的探究雷公藤内酯酮(Triptonide,TN)体外抗人胰腺癌Panc-1细胞的作用,并初步探究TN抗人胰腺癌Panc-1细胞的作用机制。方法1.CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同浓度TN对人胰腺癌Panc-1细胞体外增殖的影响。2.EdU细胞增殖试验检测TN对人胰腺癌Panc-1细胞增殖能力的影响。3.集落形成试验(Clonogenicity assay)检测TN对
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目的探究雷公藤内酯酮(Triptonide,TN)体外抗人胰腺癌Panc-1细胞的作用,并初步探究TN抗人胰腺癌Panc-1细胞的作用机制。方法1.CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同浓度TN对人胰腺癌Panc-1细胞体外增殖的影响。2.EdU细胞增殖试验检测TN对人胰腺癌Panc-1细胞增殖能力的影响。3.集落形成试验(Clonogenicity assay)检测TN对人胰腺癌Panc-1细胞集落形成能力的影响。4.迁移侵袭试验(Transwell)检测TN对人胰腺癌Panc-1细胞的迁移侵袭能力的影响。5.流式细胞仪检测TN对人胰腺癌Panc-1细胞凋亡的影响。并通过免疫印迹(Western blot)法检测细胞内Cle-Caspase-3等凋亡相关蛋白表达的变化。6.彗星试验(Comet assay)检测TN对人胰腺癌Panc-1细胞DNA链断裂水平的影响。7.免疫印迹(Western blot)方法检测TN处理后人胰腺癌Panc-1细胞内多聚核苷酸-5’磷酸激酶-3’磷酸酶(PNKP)的表达水平。用shRNA抑制人胰腺癌Panc-1细胞内PNKP表达,免疫印迹(Western blot)方法检测人胰腺癌Panc-1细胞内PNKP表达变化,彗星试验(Comet assay)检测人胰腺癌Panc-1细胞内DNA链断裂水平变化。8.用shRNA抑制人胰腺癌Panc-1细胞内PNKP表达,观察抑制后人胰腺癌Panc-1细胞集落形成及迁移能力的变化。结果1.TN在纳摩尔(nM)级别即可显著抑制Panc-1细胞增殖,并且随着浓度增加抑制作用增强。2.TN处理后,Panc-1细胞的增殖能力显著降低。3.TN处理后,Panc-1细胞的集落形成能力显著降低。4.TN处理后,Panc-1细胞的迁移侵袭能力显著降低。5.TN可显著诱导Panc-1细胞的凋亡。6.TN处理后导致Panc-1细胞内DNA链断裂增多。7.TN处理后Panc-1细胞内PNKP蛋白含量下降。shRNA抑制PNKP表达后,Panc-1细胞内DNA链断裂增多。8.shRNA抑制PNKP表达后,Panc-1细胞集落形成能力及迁移能力均被显著抑制。结论1.TN能显著抑制人胰腺癌Panc-1细胞增殖、集落形成,减弱其迁移侵袭能力,并诱导胰腺癌细胞凋亡。2.TN的抗胰腺癌Panc-1细胞作用可能与其抑制PNKP表达,从而抑制DNA损伤修复有关。
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