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目的疏水性小分子化合物的难成药性问题限制了其临床应用,如何通过改善小分子的疏水性达到增效减毒目的成为亟待解决的瓶颈问题。基于此,本课题探索了一种基于透明质酸（HA）的自组装疏水小分子纳米药物的合成方法。为探究其应用潜质,本课题进一步以难溶性成分雷公藤红素（CST）为代表自组装合成纳米药物,以期解决CST在治疗非酒精性脂肪肝炎（NASH）中所面临的强疏水性和系统毒性的难题,为解决疏水小分子化合物的难成药问题提供新的思路和方法。方法利用自组装技术将多个疏水小分子化合物与HA制备成纳米药物,并利用马尔文粒度仪及透射电子显微镜对纳米药物进行表征。以雷公藤红素（CST）作为疏水小分子化合物的代表,制备CST/HA纳米药物（CHNPs）。通过比较由不同投料比及不同HA分子量所制备的CHNPs的粒径大小、分散系数、粒子形态、包封率和载药量,对CHNPs的制备工艺进行处方优化。通过比较CHNPs在水中、PBS中以及DMEM（含10%FBS）静置48h后的粒径大小变化评价CHNPs在体液中的稳定性。通过对比CHNPs室温静置30天前后的溶液澄清度及粒径大小变化评价CHNPs的长期贮存稳定性。利用紫外分光光度法以及粒度法探究CHNPs的自组装机制。在细胞层面上探究CST及CHNPs对非酒精性脂肪肝炎（NASH）的治疗靶细胞,肝细胞及巨噬细胞的影响:通过CCK8法确定细胞实验的给药剂量,利用油红O染色法与细胞内甘油三酯含量检测法比较CST与CHNPs在Hep G2高脂细胞模型中的降脂能力,并通过共聚焦荧光成像探究CHNPs在Hep G2细胞中的摄取。利用免疫印迹法在RAW264.7炎症细胞模型中比较CST和CHNPs的抗炎能力,并利用流式细胞术进一步探究二者对巨噬细胞极化的影响。通过共聚焦荧光成像以及细胞内CST含量检测探究CST和CHNPs在RAW264.7细胞中的摄取。采用流式细胞术以及细胞摄取抑制剂法探究CHNPs在RAW264.7细胞中的摄取机制。以高脂喂养（HFD）20周的C57BL/6J雄性小鼠作为NASH动物模型,通过活体荧光成像探究CHNPs在小鼠体内的分布。在对NASH小鼠进行28天的CST及CHNPs腹腔给药后,通过检测小鼠肝脏脂质沉积水平、肝脏炎症因子水平以及肝脏损伤标志物水平评价CST和CHNPs的抗NASH治疗效果。通过对比治疗前后小鼠体重变化、血清瘦素水平以及糖耐量和胰岛素耐量,评价CST和CHNPs对小鼠肥胖及胰岛素抵抗的影响。通过对肝脏进行Masson染色及α-SMA免疫荧光成像评价CST和CHNPs对缓解肝脏纤维化的治疗作用。最后通过HE染色评价CST和CHNPs的心、脑、肝、脾、肺、肾毒性。结果疏水小分子化合物在水中发生聚集,形成絮状沉淀,粒径较大,分散性较差。当其与HA自组装形成纳米药物后,在水中无沉淀产生,粒径较小且分散性良好,电镜下显示为形态大小均一的球形纳米颗粒。上述结果表明,通过形成纳米药物可以改善疏水小分子化合物在水中的分散性与稳定性。通过对CHNPs的处方优化,确定其最佳投料比为CST:HA=1:100（质量比）,HA分子量为17k Da。优化后的CHNPs在PBS中以及DMEM（10%FBS）中放置48小时粒径大小无明显变化。在室温下静置30天后CHNPs的外观、粒径大小、分散指数均无明显变化。表明CHNPs在体液中具有较高的稳定性并且具备长期贮存的稳定性。通过对CHNPs自组装机制的分析,CHNPs主要通过疏水作用力结合形成纳米颗粒。在高脂Hep G2细胞模型中,CHNPs相比于CST具有更强的降脂能力,且CHNPs能够选择性蓄积在高脂的Hep G2细胞中,在正常Hep G2细胞中摄取较少。在RAW264.7炎性细胞模型中,相比于CST,CHNPs展现出更优秀的抗炎能力并且能够更有效地抑制巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化。细胞摄取实验结果表明,M1型巨噬细胞摄取CHNPs的能力明显强于CST,这可能是CHNPs具有更强抗炎能力的原因之一。除此之外CHNPs能够选择性地蓄积在M1型巨噬细胞中,在M0型巨噬细胞中蓄积较少。这是由于巨噬细胞主要通过表面CD44与CHNPs表面HA之间的相互作用介导CHNPs的摄取,当巨噬细胞分化为M1型巨噬细胞时,细胞表面CD44表达增加,摄取CHNPs的能力增强。活体荧光成像结果表明,CHNPs在小鼠体内主要在肝脏蓄积。小鼠治疗实验结果表明,CHNPs相比于CST具有更强的抗NASH效果,并且能够有效控制肥胖小鼠体重、改善胰岛素抵抗并抑制肝脏纤维化。在治疗剂量下CHNPs无明显器官毒性,而CST对脾脏具有一定的毒性作用。在高剂量下,尽管CHNPs和CST均出现了脑毒性,但CHNPs显著降低了CST的心脏毒性和脾脏毒性。结论本课题构建了一种疏水小分子化合物自组装纳米药物的制备方法,通过该技术显著改善了疏水小分子药物在水相的分散性与稳定性。该制备方法绿色简单,所制备的纳米药物具备良好的生物相容性。为验证该技术的应用潜质,本课题以难溶性成分CST为代表自组装合成纳米药物CHNPs,以期解决CST在治疗NASH中所面临的强疏水性和系统毒性的难题。实验结果表明,CHNPs显著改善了CST在水中的稳定性,并具备长期贮存的能力。CHNPs相比于CST能够更有效地治疗NASH。除此之外CHNPs还能改善患NASH小鼠的肥胖症和胰岛素抵抗并且抑制肝脏的纤维化,从多因素治疗NASH,并阻止其进一步病理性进展。更重要的是,CHNPs在治疗剂量下具有良好的生物安全性,且在大剂量毒性实验中能够显著降低CST的心脏毒性和脾脏毒性。综上所述,本文构建的小分子自组装纳米药物的合成方法具有工业化生产的可能性,并且以CST为代表验证了其临床应用价值,为其他疏水小分子药物的进一步开发和临床应用提供新的思路和见解。