论文部分内容阅读
本论文分为2个部分,第一部分是人生长分化因子GDF3在乳腺癌中的功能初探,第二部分是CDK5剪接本的克隆及其生物学性质分析。第一部分：转化生长因子β超家族是一类分泌型的多肽,它们在各种生理过程中都起到了重要的作用。作为该家族的成员,目前人们对GDF3的研究主要集中在以下三个方面：1)作为一个脂肪生成的细胞因子；2)作为一个干细胞的标记；3)在早期胚胎发育中起作用,但至今GDF3在乳腺癌发生过程中的作用未有报道。我们首先发现GDF3在乳腺癌组织中显著下调,利用重组表达的蛋白刺激乳腺癌细胞,可以抑制其生长。慢病毒敲减GDF3后,虽然对于细胞周期,细胞的粘附性和迁移性没有显著影响,但是对于克隆形成有促进作用,也提升了细胞在软琼脂中的非锚定依赖性生长能力。此外,我们还发现过表达GDF3可以促进紫杉醇和索拉非尼诱导的细胞凋亡。对GDF3生物学功能的研究将有助于进一步了解乳腺癌的发生发展,揭示乳腺癌发生机制,对乳腺癌的诊断治疗有着重要的理论和实际意义。第二部分：周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDKs)是一类丝氨酸/苏氨酸激酶家族,它们对于调节细胞周期的进程起着不可或缺的作用。我们首先从人的睾丸cDNA文库中克隆了人CDK5基因以及一个新颖的CDK5剪接本,命名为CDK5-SV。该剪接本缺少CDK5的第7个外显子,因而相应的缺少了260个氨基酸。通过RT-PCR的方法,我们分析了该剪接本在不同人组织中的表达情况,CDK5-SV表达于睾丸、骨骼肌、结肠、骨髓和卵巢,但是CDK5却是广谱表达的。HeLa细胞中的免疫荧光实验证明CDK5和CDK5-SV有着完全不同的亚细胞定位。CDK5主要定位在细胞质中,而CDK5-SV主要集中在细胞核内。荧光素酶报告实验显示,通过与β-catenin的共转,CDK5和CDK5-SV都可以抑制Wnt/β-catenin信号通路。此外,CDK5-SV也可以像CDK5一样与(3-catenin互作。我们的结果表明,CDK5-SV是Wnt/p-catenin信号通路的一个负调控因子。