【摘 要】
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目的:探索长链非编码RNA LINC01614在胃癌组织和细胞中的表达,研究LINC01614对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:1.实时荧光定量PCR鉴定配对的胃癌组织和癌旁组织中lnc RNA LINC01614的表达,以及LINC01614在胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞中的表达。2.对LINC01614进行生物信息学分析和功能预测。利用癌症基因组图谱计划（The Cancer Genome A
【基金项目】
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放大染色内镜结合液体活检在上消化道早癌筛查中的多中心研究,桂科AB18221084,广西壮族自治区科技厅
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目的:探索长链非编码RNA LINC01614在胃癌组织和细胞中的表达,研究LINC01614对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:1.实时荧光定量PCR鉴定配对的胃癌组织和癌旁组织中lnc RNA LINC01614的表达,以及LINC01614在胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞中的表达。2.对LINC01614进行生物信息学分析和功能预测。利用癌症基因组图谱计划（The Cancer Genome Atlas Program,TCGA）和Gene expression omnibus（GEO）鉴定LINC01614在胃癌组织和癌旁组织的表达,随后利用TCGA数据库的患者临床数据,分析LINC01614与临床、病理特征的相关性。根据患者的临床生存信息,进一步分析长链非编码RNALINC01614表达与患者生存预后的关系。通过下载得到的TCGA-STAD数据,预测LINC01614的共表达基因,并进行通路富集,从而了解LINC01614在胃癌中的生物学功能及其可能参与的通路。3.利用RNAi干扰LINC01614的表达,建立相应的细胞模型:实验组（LINC01614下调组）和对照组。实验组中利用胃癌细胞MGC-803和胃癌细胞AGS转染si-LINC01614-1和si-LINC01614-2,而对照组则为MGC-803细胞和AGS细胞转染si-NC。并对各个组别的细胞进行PCR检测,鉴定LINC01614的表达。4.利用慢病毒转染SGC-7901细胞,构建并鉴定过表达LINC01614的稳转细胞株SGC-7901-LINC01614和对照组SGC-7901-NC细胞,随后利用PCR鉴定相应细胞中的LINC01614的表达。5.利用CCK-8实验以及细胞集落形成实验,研究敲低LINC01614表达对胃癌细胞增殖的影响。6.利用细胞划痕实验和Transwell实验,研究敲低LINC01614表达对胃癌细胞迁移及侵袭的影响。7.运用流式细胞术检测敲低LINC01614和过表达LINC01614对细胞周期分布和凋亡情况的影响。结果:1.实验结果发现,在22对配对胃癌组织和癌旁组织样品中,20对胃癌组织中LINC01614的相对表达较配对的癌旁组织出现上调,且两组中LINC01614的表达差异存在统计学意义（P<0.0001）。2.对TCGA-STAD数据集进行下载和分析,发现LINC01614的表达在27对配对的胃癌组织和癌旁组织中存在差异,而在非配对的样品中,胃癌组织中的LINC01614表达同样较癌旁组织出现升高（P<0.05）。而根据对GEO数据库数据集GSE95667进行分析发现,胃癌组织中的LINC01614表达同样出现上调,其相对癌旁组织的log2差异倍数为1.953（P0.05）,与T分期（P=0.00187）、组织学分级（P=0.0177）、残余癌（P=0.0218）相关;高表达LINC01614的胃癌患者对应较高级别的T分期（P<0.001）、组织学分级（P<0.01）和残余癌（P<0.001）。基于LINC01614潜在的靶向mRNA,根据细胞本体论,LINC01614富集到包括细胞外基质、中性粒细胞激活、生长因子结合等通路（P<0.05）。而在KEGG通路富集分析中,LINC01614潜在靶基因同样富集到已被广泛证实与胃癌发生发展相关的通路,如PI3K-Akt信号通路、细胞周期、TGF-b信号通路（P<0.05）。3.利用si-LINC01614-1和si-LINC01614-2敲低LINC01614表达,胃癌细胞MGC-803和AGS的增殖、迁移、侵袭能力较对照组细胞出现抑制（P<0.05）。同时,干扰LINC01614表达,可使细胞周期阻滞在G2/M期（P0.05）。4.过表达LINC01614的SGC-7901-LINC01614细胞和对照组SGC-7901-NC细胞相比,SGC-7901-LINC01614相对对照组SGC-7901-NC处于G2/M期的减少（P0.05）。结论:长链非编码RNA LINC01614在胃癌组织和细胞中的表达上调,其表达与胃癌患者不良预后相关。LINC01614可作为癌基因参与胃癌发生发展。
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