肝癌细胞上清液促进成纤维细胞表达COX-2和HGF的研究

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目的:观察小鼠肝癌细胞上清液对成纤维细胞转分化、增殖的影响及环氧合酶-2(COX-2)、肝细胞生长因子(HGF)表达水平变化的影响。探讨成纤维细胞是否可以用来解决移植后肝细胞长期生存率低这一难题。方法:MTT法检测普通培养液、含有小鼠肝癌细胞上清液的条件培养液以及含有转化生长因子(TGF-β1)的培养液对成纤维细胞增殖情况的影响,用RT-PCR以及免疫组织化学法及检测在不同培养液培养下,成纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、COX-2及HGF的mRNA及蛋白表达情况。结果:MTT法的结果显示条件培养液及含TGF-β1的培养液对成纤维细胞增殖有一定的促进作用,但条件培养液的促进作用更强。RT-PCR的结果显示条件培养液以及含TGF-β1的普通培养液比普通培养液更有利于成纤维细胞转化为以α-SMA为标志的肌成纤维细胞,并能维持表型稳定;且能促进肌成纤维细胞稳定的表达COX-2及HGF。在第3天时α-SMA的表达达到最高峰,并在第3天后表达稳定。COX-2、HGF在第5天表达达到最高峰,并保持稳定。但普通培养液中的成纤维细胞不表达COX-2、HGF。结论:小鼠肝癌细胞上清液能有效、稳定地使成纤维细胞转分化成为稳定表达COX-2、HGF的肌成纤维细胞。成纤维细胞只有在转分化后才能表达COX-2、HGF,而且成纤维细胞在肝癌细胞上清液的作用下增殖明显,表达COX-2、HGF的水平较高。以上结果为将来成纤维细胞联合肝细胞移植来提高移植后肝细胞长期生存率奠定了理论基础。
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