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菜籽粕是油菜籽榨油之后的副产物,含有大量蛋白质。但是,菜籽粕中存在硫甙、植酸和单宁等抗营养因子,使其营养价值下降,从而使菜籽粕的应用被限制。微生物固态发酵菜籽粕可得到加工特性和生物活性比蛋白更优越的低分子肽,是实现菜籽粕深层次加工利用的重要途径。本文采用超滤、离子交换色谱和凝胶过滤法分离获得高抗氧化活性的肽组分,研究其体外模拟消化特性和在大鼠离体外翻小肠中的吸收特性,并研究菜籽肽分离组分对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠记忆障碍的保护作用和对红细胞脂质过氧化损伤的影响,发掘其潜在的抗衰老功能。主要研究内容及结论如下:(1)采用超滤、离子交换色谱和凝胶过滤纯化技术对发酵菜籽抗氧化肽进行了试验研究。采用5 kDa和3 kDa的超滤膜进行超滤,分子量小于3 kDa分离组分RP1的DPPH·清除率最大,半抑制浓度从0.80 mg/mL降低至0.27 mg/mL。离子交换色谱进一步分离得到三个洗脱峰,第二个洗脱峰RP1-E2蛋白回收率和活性回收率最大,分别为53.3%和61.1%,其半抑制浓度(IC50)最低,为0.172mg/mL。再进一步通过葡聚糖凝胶纯化分离得到三个洗脱峰,第三个洗脱峰RP1-E2-G3的IC50值达到0.099 mg/mL,比纯化前下降了42.4%,抗氧化活性显著提高。由氨基酸分析可知RP1-E2-G3同时具有较高营养价值。(2)通过体外模拟消化及大鼠离体外翻肠囊吸收试验,研究了发酵菜籽粕水提多肽的消化、吸收特性。发酵菜籽肽在胃肠消化阶段均有不同程度的水解,小肠中的水解程度更高,水解度从4.96%增加到18.32%,表面疏水性从61.33%降低到53.48%,并且其DPPH·清除率、·OH清除率和还原力均显著增加。发酵菜籽肽经消化后,分子量大于1,000 Da组分的含量有所减少,分子量200500 Da的组分含量增加,发酵菜籽肽经过胃肠消化后更有助于肠道吸收。发酵菜籽肽在小肠内有较高吸收率,最高达63.34%,优先吸收二肽、三肽等抗氧化活性较强的短肽,其IC50值最低达0.255 mg/mL。(3)利用D-半乳糖建立衰老小鼠记忆障碍模型。通过小鼠水迷宫试验和血清、脑组织中丙二醛(MDA)含量以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、ATP活力测定,探究RP1对D-半乳糖诱导衰老小鼠记忆障碍模型的保护作用。RP1能够有效改善模型小鼠空间学习记忆损伤,增强小鼠记忆能力;能够有效改善模型小鼠脑组织和血清抗氧化能力,脑组织GSH-Px、T-SOD和ATP活力显著提高,MDA含量显著降低;血清GSH-Px和T-SOD活力显著提高;并且显著提高模型小鼠脾脏、肝脏指数。(4)通过吩嗪硫酸甲酯(phenazine methosulfate,PMS)建立大鼠红细胞脂质过氧化损伤模型。观察RP1对大鼠红细胞溶血率、高铁血红蛋白(MHb)、MDA含量、T-SOD活性、GSH-Px活性、ATP活性以及大鼠红细胞膜蛋白巯基(-SH)含量的影响。RP1能够抑制PMS诱导的大鼠红细胞溶血和MHb的产生;提高PMS氧化损伤大鼠红细胞中T-SOD、GSH-Px和ATP活性,降低MDA含量;抑制PMS引起的大鼠红细胞膜蛋白巯基含量的降低。