青蒿琥酯对桥本氏甲状腺炎EAT模型的实验研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mengminyan
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目的:本课题通过青蒿琥酯注射液对自身免疫性甲状腺炎大鼠模型的观察,了解其治疗疗效,探讨青蒿琥酯对自身免疫性甲状腺炎的治疗作用,初步探索其作用机制,为中医药治疗该病提供参考,并为其治疗提供新的思路。方法:将55只健康的雌性Wistar大鼠分为正常对照组,模型对照组,优甲乐组,青蒿琥酯高、中、低剂量组。除正常对照组外,其他各组建立实验性自身免疫性甲状腺炎动物模型(EAT)。经过1周的适应性饲养后,正常饮用水喂养。第2、3周开始初次免疫(一周一次),通过注射由磷酸盐缓冲液(PBS)溶解的猪甲状腺球蛋白(PTg)溶液,其浓度为1 g·L-1,与弗氏佐剂(内含8mg/ml HR37a结核杆菌,干重)等体积混合,乳化成油包水制剂,来完成初次免疫。第4周开始进行增强免疫,将配制好的PTg溶液与不完全弗氏佐剂(CFA)按体积比1∶1混合乳化,每只大鼠按PTg 200μg在背、腹腔、腿、颈部等多点皮下注射,连续6周,每周一次,配合高碘水(1L水中加入0.64g碘化钠配制)引水喂养。另外,以大鼠每周一次灌胃,每次2ml计算。从第6周开始(与增强免疫间隔2d),青蒿琥酯高中低剂量组每日分别给予青蒿琥酯注射液75,15,3 m g·kg-1,优甲乐组每日给予优甲乐混悬液1.5 mg·kg-1,连续灌胃4周。双抗原一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检查血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAB)、甲状腺过氧化物酶抗体TPO-AB;光镜下观察甲状腺细胞形态;Real-time聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠脾脏T-bet m RNA、GATA m RNA的表达。以Graph Pad Prism及SPSS23.0版软件进行数据分析和处理。结果:1、ELISA法检测中可以得出,模型对照组的FT3、FT4含量与其余各组相比,FT3、FT4有显著性差异(P<0.01)。与正常对照组比较,模型对照组FT3、FT4均升高。同样Tg Ab、TPOAB的含量,与模型对照组比较,青蒿琥酯高中低三组及优甲乐组Tg Ab、TPOAB明显较模型组降低,均差异有统计学意义(均P<0.01)。2、光镜结构下显示:空白组与青蒿琥酯高剂量组相比较,P>0.05,无统计学意义,与其他各组相比较有统计学意义,P<0.05;病证模型组与青蒿琥酯中、高剂量组以及优甲乐组比较,P<0.05,有统计学意义,与青蒿琥酯低剂量组比较无统计学差异;青蒿琥酯高剂量组与优甲乐组、青蒿琥酯中剂量比较无统计学差异,与青蒿琥酯低剂量组比较,P<0.05,有统计学差异。3、各组大鼠甲状腺组织T-bet、GATA-3m RNA的表达:与正常组相比,模型组的T-bet的表达显著增加(P<0.01),GATA-3的表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,青蒿琥酯注射液治疗各组的T-bet的表达均有所下降,其中高剂量组有统计学意义(P<0.01),而青蒿琥酯注射液治疗各组的GATA-3的表达均有所上升,其中高剂量组有统计学意义(P<0.01)。结论:1.青蒿琥酯可以减少自身免疫性甲状腺炎自身抗体TGAb和TPOAb的形成,减少自身抗体对甲状腺组织的损伤。2. 青蒿琥酯组及优甲乐组都能减少自身免疫性甲状腺炎淋巴细胞的浸润,减轻其炎性反应,可以缩小肿大的甲状腺,但青蒿琥酯高剂量组相对来说疗效尤其显著,优于青蒿琥酯中、低剂量组,与优甲乐组相似。3、青蒿琥酯对自身免疫性甲状腺炎有一定程度的治疗作用,提示其作用机制可能通过下调T-bet表达、上调GATA-3表达,从而改善Th1/Th2失衡及增加调节性T细胞数量,最后参与桥本甲状腺炎的免疫调节过程。
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