IL-24泛素化位点突变体抗肿瘤作用的研究

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cassyqc
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目的:研究比较IL-24泛素化位点突变体和野生型IL-24对肿瘤细胞HeLa,HepG2的生长抑制作用并初步探讨其机制,为临床应用IL-24泛素化位点突变体治疗恶性肿瘤奠定实验基础。   方法:培养宫颈癌细胞株HeLa、肝癌细胞株HepG2,分别用pcDNA3.1、pcDNA3.1/IL-24和pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体转染两种细胞株,于不同时间收集细胞。通过CCK-8检测细胞增殖;FITC-Annexin V染色检测细胞早期凋亡;DAPI染色检测细胞晚期凋亡;Western blot检测Bax, Bcl-2的表达和Caspas-3的活化情况。   结果:   1.质粒转染48h后,Western blot证实pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体和pcDNA3.1/IL-24组中均表达IL-24蛋白,且pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组IL-24的表达较pcDNA3.1/IL-24组高(P<0.05),表明对IL-24进行突变后延缓IL-24蛋白的降解。   2.CCK-8结果显示:(1)pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体和pcDNA3.1/IL-24对两种肿瘤细胞株均有生长抑制作用,且这种抑制作用随着时间的延长而增加;(2)pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组对肿瘤细胞的抑制作用与pcDNA3.1/IL-24组相比差别有统计学意义(P<0.05),其抑制作用明显大于pcDNA3.1/IL-24组。   3.FITC-Annexin V染色结果显示在肿瘤细胞中pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组和pcDNA3.1/IL-24组均有早期凋亡细胞,且pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组早期凋亡阳性率高于pcDNA3.1/IL-24组(P<0.05)。   4.DAPI染色结果显示在肿瘤细胞中pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组和pcDNA3.1/IL-24组均有晚期凋亡细胞,且pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组晚期凋亡阳性率高于pCDNA3.1/IL-24组(P<0.05)。   5.细胞转染48小时后,Western blot检测空白组,pcDNA3.1组,pcDNA3.1/IL-24组和pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组四组中Bax, Bcl-2蛋白表达。就肿瘤细胞而言在检测的四组中,Bax/Bcl-2的比值pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组和pcDNA3.1/IL-24组是增加的,且pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组Bax/Bcl-2的比值较pcDNA3.1/IL-24组高。   6.细胞转染48小时后,Western blot检测空白组,pcDNA3.1组,pcDNA3.1/IL-24组和pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组四组中Caspas-3的活化情况。就肿瘤细胞而言在检测的四组中,pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组和pcDNA3.1/IL-24组检测到活化的Caspas-3,且pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体组Caspase-3活化量较pcDNA3.1/IL-24组高。   结论:构建的pcDNA3.1/IL-24泛素化位点突变体延缓IL-24蛋白降解,且与IL-24相比诱导肿瘤细胞凋亡的作用更强。结果支持IL-24泛素化位点突变体在肿瘤治疗中的作用。  
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