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目的:构建新型II型单纯疱疹病毒DNA疫苗,并鉴定其在真核细胞中的表达,为疫苗的免疫学效应研究打下基础。方法:在vero细胞中培养并扩增HSV-2病毒,提取总RNA,RT-PCR法扩增UL54全长基因(表达ICP27蛋白),连接至pMD19-T Simple Vector载体,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒,KpnI和XbaI双酶切后将UL54片段插入真核表达质粒pCDNA3.1(+)中,构建pcDNA3.1(+)/ICP27重组质粒(即HSV-2 DNA疫苗),经双酶切鉴定和测序鉴定正确后,脂质体法转染COS-7细胞,RT-PCR、Western-blot法鉴定HSV-2 DNA疫苗在COS-7细胞中的转录和表达。结果:成功构建pcDNA3.1(+)/ICP27重组质粒,双酶切鉴定分别显示了5428bp的pCDNA3.1(+)载体条带和1551bp的UL54条带,测序鉴定与Genbank中HSV-2 UL54序列一致。在转染COS-7细胞后,RT-PCR成功检测出UL54特异性片段184bp,Western-blot法成功检测出约53kDa ICP27蛋白的表达。结论:本实验成功构建了新型单纯疱疹病毒II型DNA疫苗,并可在真核细胞中表达,为下一步研究该疫苗的免疫学效应打下坚实基础。