为了使产氢菌种应用于工业化生产，需要对产氢细菌进行扩大培养。本文首先优化了产氢细菌B49的扩培培养基，以提高单位体积培养液的细胞密度；在此基础之上进行了分批培养和补料分批培养，并初步研究了群落结构优化技术。 氮源对B49的细胞浓度有较大影响。B49最适生长氮源为牛肉膏、酵母粉和蛋白胨的混合氮源。使用混合氮源，B49的细胞浓度为0.46g/L。在此基础之上研究了C/N对B49细胞浓度的影响，当C/N为3.3时，B49细胞浓度最高，达到0.57g/L。 向C/N为3.3的培养基中加入磷酸盐、碳酸钙或尿素任一种缓冲物质均能提高B49的细胞浓度，其中以尿素的效果最好，细胞浓度为1.5g/L，与对照相比，细胞浓度提高了163％。同时产氢和产VFA也得到促进。 在优化培养基的基础之上进行B49的二级扩大培养。在分批培养中，B49延滞期在4h左右，细胞浓度达到1.8g/L；在补料分批培养中，以40％～80％的体积补料，B49细胞浓度均能在10h之内达到1.5g/L。 采用半胱氨酸降低糖蜜培养基氧化还原电位效果较好；培养基中糖蜜浓度升高则B49细胞浓度降低，适宜的糖蜜浓度在2～4％(V/V)之间；向糖蜜中加入酵母粉能促进B49生长和产氢，适宜的酵母粉浓度为4g/L，此时细胞浓度达到0.74g/L。 在三级扩大培养中，以糖蜜为底物进行扩培，B49细胞浓度达到1.23g/L。经验证，这些扩培的菌种具有较高的产氢活性，因此，可以作为群落优化的高效菌种进行投加，以糖蜜进行三级培养可以节省生产成本60％。 将B49经过低浓度糖密驯化后投加，投加后反应器产氢速率和氢气含量有大幅度上升，重新稳定后产氢速率达到6.7L/d，比投菌前提高了六倍。投菌后VFA中乙醇和乙酸含量上升，发酵类型进一步向乙醇型发酵发展。 DGGE检测结果表明，群落优化后反应器中微生物种群发生巨大变化，既有优势微生物的消亡，又有微生物新种类的出现，代表B49种属的条带在投菌后持续增强，可见驯化后的B49能适应反应器环境进行生长。