论文部分内容阅读
背景目的:过氧化物酶体增殖物激活受体(Peroxisome Proliferator-Actived Receptors, PPAR)是对机体代谢过程起重要调节作用的一种核激素受体。它包含3种不同的受体,分别PPARa、PPARβ和PPARγ。这些核激素受体由其配体(激活物)激活后,通过偶联特异的反应元件来调控多种靶基因的表达。近来研究表明肿瘤组织及细胞可表达PPARγ,且经其激活物活化后可影响肿瘤细胞的分化、增殖及凋亡。本研究的目的是分析PPARγ在胶质瘤组织和恶性胶质瘤细胞株U-251的表达,及与胶质瘤临床病理级别之间的关系,并探讨PPAR的激动剂吡格列酮(Pioglitazone)对胶质瘤细胞系U-251生长的影响,及其与细胞凋亡和凋亡调控蛋白Caspase-3的关系,初步探讨PPAR激动剂的抗胶质瘤作用及其可能机制。方法:应用半定量RT-PCR法和免疫组织化学方法检测正常脑组织、不同分化级别人脑胶质瘤组织标本和胶质瘤瘤细胞株U-251中PPARγ的表达。应用MTT法检测不同浓度吡格列酮及其在不同作用时间对胶质瘤细胞U-251生长的影响;细胞培养观察细胞的形态变化并利用AO/EB荧光染色观察细胞凋亡形态的变化;流式细胞仪检测药物处理后不同作用时间的细胞凋亡率;用Western blot法检测用药后细胞内活性Caspase-3蛋白的表达。结果:1. PPARγmRNA和PPARγ蛋白在正常脑组织、人脑胶质瘤标本和胶质瘤细胞株U-251均可表达,且在人脑胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织(P<0.05);人脑胶质瘤I～II级组和III～IV级组中PPARγmRNA和PPARγ蛋白表达均显著高于正常脑组织(P<0.05),并且在人脑胶质瘤III～IV级组中的表达显著高于I～II级组(P<0.05)。2. MTT法检测显示:25、50、100、200μmol·L-1吡格列酮对胶质瘤细胞株U-251均有生长抑制作用(P<0. 05 ),并呈时间与剂量依赖关系。3.细胞培养形态学观察和AO/EB荧光染色观察细胞凋亡形态变化:100μmol·L-1吡格列酮作用细胞48小时后,药物组细胞皱缩、变小,并有核固缩等凋亡表现。4.流式细胞仪定量检测显示:100μmol·L-1浓度的吡格列酮可诱导胶质瘤细胞的凋亡,并呈时间依赖关系(P<0. 05 )。5. Western blot检测显示:100μmol·L-1浓度的吡格列酮不同时间作用U-251细胞后,对照组U-251未发现活性Caspase-3的表达,24小时组出现明显表达,48小时达到高峰,72小时明显降低,两两比较有显著差别(P<0.05)。结论:1.PPARγ在人脑胶质瘤和正常脑组织中均表达,与人脑胶质瘤的病理分级相关,可能参与人脑胶质瘤的发生、发展过程。2.PPARγ激动剂吡格列酮对胶质瘤细胞U-251具有生长抑制作用,并在一定范围内呈时间与剂量依赖关系。3.PPARγ激动剂吡格列酮可诱导胶质瘤细胞的凋亡,这可能参与了其抑制细胞生长作用,是抑制细胞生长作用机制的一部分。4.PPARγ激动剂吡格列酮作用可上调活性Caspase-3蛋白的表达,提示其诱导胶质瘤凋亡有通过Caspases依赖性的凋亡通路途径。具体机制尚待进以一步研究。