目的：骨髓基质细胞(MSCs)是存在于骨髓中除造血干细胞之外的另外一种干细胞，它不仅具有强大的增殖能力，在体外扩增可获得大量子代细胞，同时具有多向分化潜能，在一定条件下不仅可分化为中胚层起源的细胞，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等，还可分化为外胚层起源的神经细胞，更为重要的是，它具有胚胎干细胞及神经干细胞无法比拟的优势：自体MSCs易于获得，可大量扩增，自体移植无免疫排斥反应，无伦理道德方面的限制，并且还可能避免了产生肿瘤的危险。MSCs有望成为治疗神经系统疾病的理想的种子细胞。为了寻找更为理想的诱导MSCs分化为神经元样细胞的药物及最佳诱导条件，本试验分别利用三磷酸腺苷(ATP)与神经妥乐平(NT)作为诱导剂，进行观察比较，以期为临床应用MSCs移植治疗神经系统疾病奠定基础。 方法： 1.取一月龄SD大鼠，麻醉后无菌条件下，取双侧股骨和胫骨的骨髓，分离出MSCs，用贴壁法培养，并连续传代、扩增，以获取更纯化的MSCs，连续观察细胞生长情况，以了解其生长特性。 2.分别取第2、5、8代细胞，消化后以1×104/ml密度种于24孔板中，每隔24h按顺序检测3个孔的细胞数，并计算3个孔细胞平均数，连续观察10d，以时间(d)为横坐标，以细胞数为纵坐标，分别绘制生长曲线，并分别计算出MSCs在对数生长期的群体倍增时间(PDT)和整个增殖期平均的PDT以及增殖后所得到的MSCs的理论数值。 3.分别用ATP与NT为诱导剂对MSCs进行诱导，比较不同浓度NT对MSCs的诱导作用。 3.1NT的终浓度分为：0.5mu/ml、1mu/ml、1.75mu/ml、2.5mu/ml、5mu/ml，诱导后分别做巢蛋白(Nestine)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫细胞化学染色，计算阳性细胞比例进行统计学分析，选出最佳诱导浓度。 3.2ATP的终浓度采用刘文忠报道的50ug/ml进行诱导。 3.3分别观察ATP与NT在最佳诱导浓度时不同时间对MSCs的诱导作用。诱导时间可分为：1d、3d、5d、7d、10d，诱导后进行免疫细胞化学染色进行检测，计算出阳性细胞比例，进行统计学分析，找出两药各自的最佳诱导时间。 3.4对ATP与NT各自于最佳条件下诱导出的阳性细胞数进行统计学分析，比较两者对MSCs的诱导作用。 结论： 1.MSCs在体外培养条件下具有强大的增殖能力，且生长特性稳定；MSCs在一定条件下可向神经元样细胞分化，更进一步证明了其具有多向分化潜能。 2.NT与ATP在体外均具有诱导MSCs向神经元方向分化的作用，且NT的诱导作用优于ATP，故NT是一种很好的诱导MSCs向神经元样细胞分化的药物。 3.MSCs向神经元样细胞转化过程中要经过神经前体细胞(其标志物为Nestine表达阳性)，再转化为神经元样细胞。