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目的:明确合肥地区的社区获得性肺炎患者的病原谱、各种典型病原体的药物敏感性和病原体在不同季节、不同年龄患者的分布特点,为临床经验治疗提供依据;设计多重PCR检测体系,寻找同时检测三种常见非典型病原体的最佳反应条件。并对多重PCR检测体系与免疫学检测两种方法进行比较,比较它们的灵敏度和特异性。方法:在不同季节收集临床确诊、且未经治疗的社区获得性肺炎患者的痰液、支气管刷物等标本,并采集其急性期和恢复期血液。对痰液进行液化,一份作细菌、真菌培养,并进行药物敏感性试验;一份留作肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌多重PCR的检测。根据肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌的DNA特异性保守序列,设计扩增片段大小不同的引物,为达到可明显区别不同病原体的目的,每一扩增片段至少相差100bp左右。对肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌标准菌株进行单一PCR扩增,对扩增产物进行DNA序列分析。对这三种非典型病原体标准菌株进行多重PCR检测试验,对多重PCR的引物、扩增时间、温度等各反应条件进行摸索,寻找最佳反应条件。以10倍梯度稀释度分析此多重PCR体系的敏感性。用此多重PCR体系分别检测分离的白色念珠菌、沙眼衣原体、大肠埃希氏杆菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、人巨细胞病毒、轮状病毒、腺病毒和Hela细胞,分析此多重PCR体系的特异性。通过上述实验,得到稳定的多重PCR反应条件后,用多重PCR和免疫学检测方法,对社区获得性肺炎患者的痰液、支气管刷物、血清等标本进行病原体的多重PCR和免疫学检测,比较这二种方法的特异性和敏感性。结果:在本研究的154例社区获得性肺炎患者中,多重感染27例,细菌合并非典型病原体感染较常见。在CAP感染的病原体中,典型病原体最为常见,其中肺炎链球菌最多;在非典型病原体感染中,以肺炎支原体最为常见。典型病原体在夏季感染较少,而非典型病原体在春季感染相对较少,非典型病原体感染在8~14岁阶段检出率最高。在分离的病原体中,肺炎链球菌对苯唑西林、氧氟沙星等的敏感率较高,化脓链球菌对呋喃妥因较敏感,不动杆菌对亚胺培南的敏感率较高,流感嗜血杆菌对阿奇霉素的敏感率达100%。建立了非典型病原体的多重PCR检测方法,多重PCR体系的敏感性:100copies/100μl。多重PCR体系特异性检测结果表明:该体系与上述病原体和真核细胞没有交叉反应,特异性高。临床标本检测:本课题总计对154例标本进行多重PCR和免疫学检测,发现非典型病原体的两重感染,没有发现非典型病原体的三重感染。在肺炎支原体检测阳性的35例样本中,PCR检测阳性而免疫学检测阴性15例,占42.86%,PCR和免疫学检测都阳性19例,占54.29%,PCR阴性而免疫学阳性1例,占2.85%。在肺炎衣原体检测阳性的7例样本中,PCR阳性而免疫学阴性1例,占14.29%,PCR和免疫学都阳性6例,占85.71%。在嗜肺军团菌检测阳性的11例样本中,PCR阳性而免疫学阴性3例,占27.27%,PCR和免疫学皆阳性7例,占63.64%,PCR阴性而免疫学阳性1例,占9.09%。显示多重PCR检测是一种敏感性高的方法。结论:多重感染在合肥地区的CAP患者中十分常见;在CAP感染的病原体中,典型病原体最为常见,其中肺炎链球菌最多,在非典型病原体感染中,以肺炎支原体最为常见;典型病原体感染在夏季较少,而非典型病原体感染在春季相对较少,非典型病原体感染多见于8~14岁的少年;针对各种病原体的敏感药物推荐基层医院使用;多重PCR体系的敏感性:100copies/100μl;能同时检测肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌的多重PCR体系的敏感性和特异性高。