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目的:建立人肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察生酮饮食及联合放化疗对裸鼠皮下移植瘤生长的影响并对其作用机制进行研究。方法:将处于对数生长期的A549细胞用0.25%胰酶消化,收获并计数,调整浓度为1.0×10~7/ml,用1ml注射器将调整好浓度的细胞悬液注射到裸鼠右下肢皮下,每只接种0.2ml,共接种20只。将建立好的裸鼠肺癌移植瘤模型随机分为4组,每组5只,分别为标准饮食组(SD组)、生酮饮食组(KD组)、标准饮食+顺铂+放疗组(SD+DDP+RT组)、生酮饮食+顺铂+放疗组(KD+DDP+RT组)。SD组和SD+DDP+RT组裸鼠喂养标准饲料,KD组和KD+DDP+RT组裸鼠喂养生酮饲料。每日观察并记录裸鼠饮食情况、精神状态、大小便及活动状况。分组当天测量裸鼠体重、血糖、血酮体值以及移植瘤的长径和短径。以后每5天测量一次。观察实验期间裸鼠的体重变化情况,计算移植瘤的近似体积,并绘制肿瘤生长曲线。待SD+DDP+RT组与KD+DDP+RT组裸鼠移植瘤体积长至100～200mm~3时,开始行放疗,放疗总剂量为4Gy,一次给予;每隔3日注射一次顺铂,共用药4次。接种细胞后第30天,摘眼球取血,送检验科进行血脂四项检测。处死裸鼠后,取出移植瘤组织做HE染色,观察肿瘤细胞形态学变化。Western blot方法及免疫组织化学方法检测裸鼠移植瘤中4-HNE的蛋白表达水平。结果:1. 接种细胞后第8～10天,肉眼可看见实体瘤,为椭圆状。20只裸鼠均成瘤,成瘤率为100%。在整个实验期间各组裸鼠饮食及精神状态未见明显异常。2. 分组当天即接种细胞第10天,SD组、KD组、SD+DDP+RT组、KD+DDP+RT组裸鼠体重相比差异无统计学意义(P>0.05)。自接种第20天起,四组裸鼠体重相比差异有统计学意义(P<0.05)。KD组及KD+DDP+RT组的裸鼠体重低于SD组和SD+DDP+RT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。其它各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。3. 接种细胞第10天、15天时四组裸鼠移植瘤体积相比差异无统计学意义(P>0.05)。在接种第20天、25天、30天时四组裸鼠移植瘤体积相比差异均有统计学意义(P<0.05)。KD组、SD+DDP+RT组、KD+DDP+RT组移植瘤体积小于SD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。KD+DDP+RT组移植瘤体积小于SD+DDP+RT组,差异有统计学意义(P<0.05)。在接种第25天和第30天时,KD+DDP+RT组移植瘤体积小于KD组,差异有统计学意义(P<0.05)。其它各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。4. 接种细胞第10天,SD组、KD组、SD+DDP+RT组、KD+DDP+RT组裸鼠血糖值相比差异无统计学意义(P>0.05)。在接种第15天、20天、30天时四组裸鼠的血糖值相比差异均有统计学意义(P<0.05)。KD组及KD+DDP+RT组裸鼠血糖值低于SD组和SD+DDP+RT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。其它各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在接种第25天时,四组裸鼠的血糖值相比差异有统计学意义(P<0.05)。除KD组与SD+DDP+RT组相比差异无统计学意义外,其它各组两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。5. 接种细胞第10天,SD组、KD组、SD+DDP+RT组、KD+DDP+RT组裸鼠血酮体值相比差异无统计学意义(P>0.05)。在接种第15天、第20天、第25天、第30天时四组裸鼠的血酮体值相比差异均有统计学意义(P<0.05)。KD组及KD+DDP+RT组裸鼠血酮体值高于SD组和SD+DDP+RT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。在接种第25天和第30天时,KD+DDP+RT组裸鼠血酮体值高于KD组,差异有统计学意义(P<0.05)。其它各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。6. 接种细胞第30天时,摘眼球取血测量不同处理组裸鼠的CHOL、HDL、TG及LDL水平,四组裸鼠测量值相比差异有统计学意义(P<0.05)。KD组及KD+DDP+RT组裸鼠的CHOL、HDL、LDL水平高于SD组和SD+DDP+RT组,而TG水平低于SD组和SD+DDP+RT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。其它各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。7. Western Blot结果显示,SD组、KD组、SD+DDP+RT组、KD+DDP+RT组4-HNE蛋白的相对表达量分别为1.00±0.03,1.45±0.10,1.52±0.07,2.49±0.06。四组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与SD组相比,KD组、SD+DDP+RT组、KD+DDP+RT组蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与KD组和SD+DDP+RT组相比,KD+DDP+RT组蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。其它各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。8. 免疫组织化学方法结果显示,SD组、KD组、SD+DDP+RT组、KD+DDP+RT组4-HNE免疫反应积分中位数为2,4,4,6。四组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与SD组相比,KD组、SD+DDP+RT组、KD+DDP+RT组蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与KD组和SD+DDP+RT组相比,KD+DDP+RT组蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。其它各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1.生酮饮食可以抑制裸鼠移植瘤的生长,生酮饮食联合放化疗的抑瘤作用更明显。其抗肿瘤机制与增加肿瘤细胞中4-HNE的表达有关。2.生酮饮食与放化疗在增强肿瘤细胞氧化应激方面存在协同作用,使得肺癌异种模型中放化疗的效果进一步提高。