负载万古霉素与BMSCs的自固化磷酸钙人工骨(CPC)治疗感染性骨缺损的实验研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:piglolo1987
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目的:  本研究将在动物体内实验,检验一种新的抗菌素缓释系统(负载万古霉素与BMSCs的自固化磷酸钙人工骨(CPC)复式缓释系统)在感染性骨缺损治疗中的效果,实验结果将作为其改进或应用于临床的依据。  方法:  1.BMSCs的分离培养与鉴定:3月龄新西兰大白兔10只,体重约1.5-2.0kg,于一侧坐骨结节处消毒,12号骨穿针穿刺后,抽取骨髓2-10mL,细胞分离,提取血清与分离液之间单核细胞层,然后加入DMEM/F12(1∶1)培养基3ml,接种于培养瓶放于孵箱培养。当细胞融合达到80%左右时进行传代至第3代MSCs,流式细胞仪检测鉴定,将BMSCs消化、重悬后调整浓度为5×108/L,留置备用。2、实验动物模型的制备:筛选60只健康新西兰大白兔,麻醉成功后,取双侧后肢内侧约2cm切口,显露胫骨中下段,用骨穿针钻孔至髓腔,经骨穿孔注入0.5ml3×109/ml金黄色葡萄球菌悬液,待大白兔麻醉苏醒后送回原饲养笼。正常喂养4周,对大白兔进行X片检查来确定哪些造模成功。3、手术方法:原切口打开皮肤,清除所有的炎性坏死组织,形成胫骨中下段1.0cm-2.0cm长节段性骨缺损。A组植入万古霉素CPC缓释系统,万古霉素用量为100mg/kg,B组植入含万古霉素和BMSCs的CPC缓释系统,万古霉素用量为100mg/kg,BMSCs用量为100μl/kg,逐层缝合切口。术后动物分笼饲养。各组再分为2、4、8、12周4个时间点,每组每时相观察点为6只(12条后肢)。各实验兔均分笼饲养以作观察。  结果:  1.一般情况:手术之后,实验人员将实验兔分笼喂养,重点观察术后一般情况和存活情况。术后1~2d所有兔精神稍差,饮食尚可,无发热。手术伤口无红肿、渗液等,3d后好转。术后约1~2周切口愈合。2.大体形态观察:术后2周,A、B两组大体观下差异不大,骨缺损明显,可见增生的软组织;4周时,A组骨缺损处被软组织覆盖,B组在病灶区出现软骨组织,触摸比较软;8周时,B组病灶基本愈合,形成触之较硬的骨痂。A组恢复不如B组,硬骨痂量少;术后12周,A、B两组骨缺损处已被修复,B组修复表面相对光滑。3.血清C反应蛋白:术后第1、3天、以及术后1、2和4周CRP(血清C反应蛋白)检测显示,A组一直高于B组(p<0.05)。4.血沉:术后第1、3天、以及术后1、2和4周ESR(血沉)检测值B组低于A组(p<0.05),第4周时ESR(血沉)检测值A组仍处在较高的水平,而B组已达正常。5.病灶X线评分:术后2、4、8周B组X线评分高于A组(P<0.05);术后第12周X线评分A、B两组无差异(P>0.05)。6.病灶组织学评分:术后2、4、8、12周B组评分均高于A组(P<0.05)。  结论:  1.结果表明与万古霉素CPC缓释系统植入组相比,植入含万古霉素和BMSCs的CPC缓释系统组的抗感染能力更强。2.结果表明与万古霉素CPC缓释系统植入组相比,植入含万古霉素和BMSCs的CPC缓释系统组的成骨能力更强。3.结果表明含万古霉素和BMSCs的CPC缓释系统可吸收性良好。4.含万古霉素和BMSCs的CPC缓释系统的局部应用对于治疗感染性骨缺损效果是良好的,可视为一种可缓慢降解吸收、具有缓释药物作用、具有一定的骨生成作用的治疗方法。
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