雌激素受体(estrogen receptor，ER)是核受体的一种，包括ERα和ERβ两种，是调节与雌激素有关的基因转录的转录因子，通过与靶基因上特异性效应元件结合或通过与其他的转录因子(例如，AP1和SP1)相互作用从而调节靶基因的表达。其作用的发挥需要共调节因子(coregulator)的参与。目前，已经发现很多ERα的共调节因子，包括共激活子和共抑制子。由于ERβ是近期发现的，所以它的共调节因子报道很少。ER在乳腺癌的发生发展过程中具有重要作用，是乳腺癌治疗的靶标和预后的指标。所以，对其共调节因子的研究有助于更好地阐明ER的作用机制，对于有效开发治疗乳腺癌的药物具有重大意义。 GA9是以ERβ为诱饵利用酵母双杂交技术从人乳腺cDNA文库中分离到的未曾报道的与ER相互作用的蛋白质(我们先将其命名为GA9)。我们已经通过GST沉降和免疫共沉淀实验获得了与酵母双杂交结果相一致的实验结果，证明了GA9与ER之间存在特异性的蛋白质间相互作用。为了进一步探究GA9的生物学功能，我们采用多种分子生物学方法。在转染含雌激素受体应答元件的ERE荧光素酶报告基因实验中，在体外和哺乳动物细胞中GA9都能够抑制ER介导的ERE荧光素酶报告基因的转录活性，而GA9的点突变体则丧失了抑制ER介导的报告基因转录活性的功能。为了深入研究GA9基因的功能，我们利用包涵体纯化蛋白的方法纯化了大量的GA9蛋白，通过免疫Balb/c小鼠制备了抗GA9的多克隆抗体，经Western blot检测，发现自制的免疫血清具有比较特异的信号，而且抗体效价也较高。利用此抗体我们在不同的乳腺癌细胞系中检测了GA9的表达，发现GA9在这些细胞系中存在着表达差异。我们还构建了GA9 siRNA真核表达载体，通过荧光素酶实验，发现通过RNA干扰敲低GA9后，ER介导的ERE荧光素酶报告基因的转录活性明显增强。同样，利用自制的抗体通过Western blot实验我们得到了与上述活性试验一致的结果。通过结晶紫生长曲线实验，我们发现GA9可以抑制乳腺癌细胞的生长，而通过RNA干扰敲低GA9后，乳腺癌细胞增殖能力恢复。根据GA9基因同源分析，我们判断GA9可能是ER的DNA或mRNA的甲基化酶。通过荧光素酶实验，利用特异性甲基化酶抑制剂AZA(5-aza-2’deoxycytidine)处理后的GA9，丧失了对ER介导的ERE荧光素酶报告基因的转录活性的抑制，且呈现出梯度效应。 这些研究结果表明，GA9可能是雌激素信号通路的一个新型调控因子。进一步的深入研究将有助于了解雌激素信号通路的调控机制及其临床治疗作用，有可能为乳腺癌的治疗提供一个新的靶标。