目的:肿瘤间质微环境中最重要的成份――活化的成纤维细胞，被称作癌相关成纤维细胞（carcinoma-associated fibroblasts,CAFs），能够分泌多种生长因子、趋化因子，可通过多种信号通路来调控肿瘤的发生发展。本实验通过观察贲门正常（normal）、癌前病变(precancerosis)、癌(carcinoma)组织中间质成纤维细胞α-SMA和CD34的表达并将其进行体外培养鉴定，旨在探索间质成纤维细胞在贲门不同癌变阶段的特征及变化，为以后进一步研究贲门腺癌相关成纤维细胞（CAFs）在贲门上皮癌变过程中的调控作用提供良好的平台。方法：1免疫组织化学（immuunohistochemistry,IHC）检测贲门正常组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、早期癌组和进展期癌组共100例组织中间质成纤维细胞α-SMA和CD34的表达情况，SPSS13.0软件包进行数据分析。2分别采用组织块贴壁法和胶原酶消化法培养贲门正常成纤维细胞（normal fibroblasts,NFs）、贲门癌前病变的成纤维细胞（precancerousfibroblasts,PCFs）、贲门癌相关成纤维细胞（carcinoma-associatedfibroblasts,CAFs），待细胞基本爬满整个培养瓶底后进行首次传代，运用胰蛋白酶消化法和反复贴壁法对细胞进行纯化。3倒置相差显微镜观察细胞大体形态。4MTT法检测细胞生长曲线。5制作细胞爬片，采用瑞氏-吉姆萨染色方法，观察细胞着色情况。采用细胞免疫组织化学技术，检测细胞多种蛋白的表达情况，包括角蛋白（keratin）、波形蛋白（Vimentin）、结蛋白（Desmin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、CD34。6透射电子显微镜观察细胞内部结构。结果：1α-SMA在贲门正常组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、早期癌组、进展期癌组的表达率分别为（0/20）、10%（2/20）、45%（9/20）、75%（15/20）、90%（18/20）。阳性细胞呈梭形，主要存在于病变周围间质中呈丝带样，在进展期癌组织中密集呈条索状包裹着癌巢。结果显示：随病变进展，间质成纤维细胞α-SMA阳性率表达呈上升趋势，但与患者性别、年龄无关。2CD34在贲门正常组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、早期癌组、进展期癌组的间质纤维细胞中阳性表达率分别为95.0%（19/20）、85%（17/20）、55%（11/20）、30%（6/20）、（0/20）；在进展期癌组中CD34仅在血管内皮细胞阳性表达，在癌周围间质纤维细胞中不表达。结果显示：随病变进展，间质成纤维细胞CD34阳性率表达呈下降趋势，但与患者年龄、性别无关。3三种细胞的生长曲线不同，均为“S”形生长曲线，3-5d为对数生长期，细胞生长旺盛，CAFs作为已经被活化的成纤维细胞，比其余2组细胞增殖能力明显增强。PCFs增殖能力介于NFs和CAFs之间。4形态学结果：①贲门正常成纤维细胞：呈扁平长梭形，大小基本一致，排列有一定的方向，单层细胞生长，存在密度抑制和接触抑制。胞质染色均匀，单核，椭圆形，位于胞质中央。胞浆内细胞器较发达，富含粗面内质网、核糖体、高尔基体，可以见到散在微丝。②贲门癌前病变相关成纤维细胞：形态不定，排列不如正常成纤维细胞整齐，局部出现重叠生长的现象。胞质染色基本均匀，胞核增大，单核，有些胞核形状不规则。胞浆中细胞器发达，可以见到大片微丝，散在可见附着斑。③贲门癌相关成纤维细胞：形态不规则，排列紊乱，无方向性，重叠生长，密度抑制和接触抑制消失。胞质染色淡，胞核大，形态不规则，核仁明显，含1-3个核仁。胞质伸展，形成较多突起，胞浆内细胞器发达，粗面内质网扩张，可以看到明显大量的微丝，局部形成微丝束，成团形成附着斑，而且大量的微丝和致密斑远离细胞核而分布存在。5细胞免疫组化染色结果：三种细胞的角蛋白和结蛋白表达均为阴性，波形蛋白表达均为阳性，α-SMA表达情况是贲门正常成纤维细胞为阴性，贲门癌相关成纤维细胞为阳性，贲门癌前病变相关成纤维细胞为弱阳性，CD34表达情况是贲门正常成纤维细胞为阳性，贲门癌相关成纤维细胞的CD34表达为阴性，贲门癌前病变相关成纤维细胞为弱阳性。结论：1免疫组化与细胞培养均证实：贲门癌变过程中间质成纤维细胞的表型发生了变化，表现为CD34表达缺失和α-SMA表达获得，提示其可能参与了贲门癌的发生与发展。2通过组织块贴壁法和胶原酶消化法，成功分离培养了贲门腺上皮不同癌变阶段间质成纤维细胞，为进一步研究成纤维细胞表型转变机制及细胞内部结构和生物学特性提供了平台。