目的:分离纯化获得荔枝核总皂苷各组分,体外筛选荔枝核总皂苷抑制Aβ1-42诱导BV-2细胞活化的关键活性成分。方法:(1)采用AKTApurifier蛋白纯化系统,分离纯化荔枝核总皂苷获得各组分。(2)5μmol/LAβ1-42诱导BV-2细胞活化,荔枝核总皂苷及其各组分干预活化的BV-2细胞。(3)瑞氏-姬姆萨染色、光镜观察BV-2细胞形态学改变。(4)ELISA测定上清液TNF-α、IL-1β、IL-6 含量;(5)Real Time PCR 和 Western blot 分别检测 TNF-α、IL-1β、iNOSmRNA和总蛋白表达。结果:(1)分离纯化获得荔枝核总皂苷12个组分(1#～12#)。(2)荔枝核总皂苷抑制BV-2细胞活化关键有效组分的筛选①形态学:倒置显微镜下,对照组:细胞形态规整、胞体呈圆形或椭圆形、突起少。Aβ模型组:细胞数量减少、突触增加、细胞抱团现象明显、胞体膨大、明显阿米巴样改变等细胞活化的标志;荔枝核总皂苷组:细胞数量增加,细胞抱团现象减少,突触明显减少;荔枝核总皂苷各成分组细胞形态表现差异较大,1#、5#、6#组分组:细胞数量有所增加,突触减少,也有部分细胞呈阿米巴样的活化状态;3#、9#成分组:细胞数量、细胞突触等活化标志与荔枝核总皂苷组类似,均明显减少。②上清液TNF-α、IL-1β、IL-6含量:与对照组比较,Aβ模型组三种炎性因子表达明显升高(P<0.01)。与Aβ模型组比较,荔枝核总皂苷组三种炎性因子表达明显降低(P<0.01);3#、5#、6#、9#、10#样品组 TNF-α明显降低(P<0.05,P<0.01);1#、3#、9#、10#样品组 IL-1β明显降低(P<0.05,P<0.01);1#、3#、5#、8#、9#样品组 IL-6明显降低(P<0.05,P<0.01),其中3#、9#组分能同时降低TNF-α、IL-1β和IL-6含量;且3#、9#组分对三种炎性因子的含量与荔枝核总皂苷组间无统计学差异(P>0.05)。(3)荔枝核总皂苷抑制BV-2细胞活化关键有效组分的验证:①形态学和上清液TNF-α、IL-1β、IL-6含量:荔枝核总皂苷、3#组分、9#组分组对BV-2细胞形态学和上清液TNF-α、IL-1β、IL-6含量的影响与初步筛选的结果一致。②TNF-α、IL-1β、iNOSmRNA表达:与对照组比较,Aβ模型组细胞TNF-α、IL-1β、iNOSmRNA表达明显升高(P<0.01);与Aβ模型组比较,荔枝核总皂苷组、3#组分组、9#组分组各炎性因子mRNA表达明显降低(P<0.01);与荔枝核总皂苷组组比较,3#样品组和9#样品组各炎性因子mRNA表达无明显差异(P>0.05)。③细胞内炎性因子蛋白表达:相对于对照组,Aβ模型组TNF-α、IL-1β、iNOS蛋白表达条带颜色加深、宽度增加,积分后相对表达量与对照组比较明显升高(P<0.01)。相对于Aβ模型组,荔枝核总皂苷组、3#组分组、9#组分组各目的蛋白表达条带亮度变浅,灰度值降低,积分后相对表达量与Aβ模型组比较明显降低(P<0.01);荔枝核总皂苷、3#组分组和9#组分组细胞中各炎性因子蛋白表达条带的亮度及宽度相近,积分后相对表达量3#组分组和9#组分组与荔枝核总皂苷组比较无明显差统计学差异(P>0.05)。结论:(1)根据实验设定的色谱分离条件,从荔枝核总皂苷中分离获得12个组分。(2)荔枝核总皂苷中3#、9#组分是抑制Aβ诱导BV-2细胞的活化的关键活性成分。