目的: 胚泡植入是妊娠建立的一个重要阶段，至今对其机制尚不清楚。已知在胚泡植入中，子宫内膜发生一系列形态和生化的表型变化，而表型变化的真正物质基础是蛋白质，这一过程需众多的蛋白质参与。本研究运用蛋白质组相关技术，分析妊娠第五天（D5）小鼠胚泡黏附时子宫内膜胚泡植入位点及其旁组织蛋白质组，从蛋白质整体水平分析探索胚泡植入的分子机制。方法： 1、建立NIH小鼠妊娠动物模型，分离D5小鼠胚泡黏附时子宫内膜胚泡植入位点及其旁组织，同时分离同龄未交配小鼠子宫内膜为对照，分别用液氮保存及常规石蜡包埋切片。2、用固相pH梯度（immobilized pH gradient , IPG）（pH3~10）聚丙烯酰胺凝胶电泳分离未交配小鼠子宫内膜、D5小鼠胚泡黏附时子宫内膜胚泡植入位点及其旁组织蛋白质组，考马斯亮蓝染色，PDQuest软件进行图像分析。3、对13个差异表达蛋白斑点用胰酶进行胶内酶切，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ ionization-time of flight-mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）分析酶切片断，得到肽质量指纹图(peptide masses fingerprint, PMF)，使用国<WP=10>际互联网上 Matrix Science 公司提供的PMF鉴定程序（Mascot: Peptide Mass Fingerprint）进行查询，每个查询得到一个分值 （Mowse Score），根据分值计算概率来评价每个检索结果是否有意义。通常可接受的域值是：一个事件随机发生的概率小于5%，则该事件为有意义（p<0.05）。4、运用RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学技术，对部分获得有意义结果的蛋白质进行进一步的验证。结果：1、双向凝胶电泳（2-dimensional gel electrophoresis, 2-DE ）图谱显示，小鼠子宫内膜蛋白质分子量 (Mw) 主要集中在14.4~75.4 kDa范围内，等电点（pI）主要分布在pH 4.0~8.0之间。PDQuest软件分析图像，结果显示未交配小鼠子宫内膜、D5小鼠胚泡黏附时子宫内膜胚泡植入位点及其旁组织2-DE 图谱间的配比率为78％，说明三者来源于相同的组织。pI 3~10、Mw 10~97 kDa范围内分离未交配小鼠子宫内膜得到大约723个蛋白点，D5小鼠子宫内膜胚泡植入位点及其旁组织分别大约为924个和891个蛋白质点，其中至少60个蛋白点在三者间有2倍以上的量变。2、13个差异表达候选蛋白质的PMF在国际互联网上查询后，有五个蛋白质获得有意义的结果（p<0.05），分别为Peroxiredoxin 1 （PDX 1）、Nucleoside diphosphate kinase B（DNPK B/nm23-M2）、Apolipoprotein A-I (Apo-AI)、Galectin-1，其中有两个蛋白点均鉴定为Apo-AI。PDX 1在胚泡植入位点旁组织表达上调，而胚泡植入位<WP=11>点与对照组间表达无明显差异。DNPK B/nm23-M2、Apo-AI和Galectin-1在胚泡黏附时小鼠子宫内膜特别是胚泡植入位点表达上调。3、RT-PCR结果亦显示，D5小鼠胚泡黏附时子宫内膜的Galectin-1 mRNA水平明显增加，特别是胚泡植入位点，Galectin-1 mRNA水平与蛋白质表达水平一致。4、RT-PCR结果显示，D5小鼠胚泡黏附时子宫内膜的nm23-M2 mRNA水平明显高于对照组，但胚泡植入位点及其旁组织间无明显差异。免疫组织化学分析，可见DNPK B/nm23-M2免疫染色阳性物质广泛积聚在植入位点子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞和基质细胞，核浓染，胞浆较少；植入位点旁子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞仍有明显免疫染色阳性物质积聚，但基质细胞明显减少；对照组小鼠子宫内膜无明显的免疫染色阳性物质积聚。5、由于NDPK A/nm23-M1与DNPK B/nm23-M2有相似的功能且结构同源性高，本研究还应用RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学技术对其在小鼠子宫内膜的表达进行分析。RT-PCR结果显示，D5小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1 mRNA表达明显高于对照组，并且植入位点明显高于植入位点旁。Western Blot分析NDPK A/ nm23-M1蛋白质表达，得到一致的结果。免疫组织化学分析结果显示，D5 小鼠胚泡黏附时子宫内膜胚泡植入位点可见NDPK A /nm23-M1免疫染色阳性物质广泛分布，特别是上皮细胞基质部、基质细胞和血窦，胞浆浓染。植入位点旁子宫内膜亦有明显免疫染色<WP=12>阳性物质积聚，但染色比植入位点子宫内膜明显变浅。对照组小鼠子宫内膜未见明显的免疫染色阳性物质积聚。结论：1、小鼠子宫内膜组织蛋白质种类繁多，D5小鼠胚泡黏附时子宫内膜特别是胚泡植入位点合成更多蛋白质，为胚泡成功地黏附和植入作充分的准备。2、硫氧还蛋白过氧化物酶（PDXs）是一个普遍存在于生物界的抗氧化物酶家族，具有多种重要的生物学功能，除能保护细胞免受ROS的损伤外，还能利用NF-kB (nuclear factor -kappaB)等多种细胞因子调节细胞信号转导来影响细胞的生长和凋亡；Pdxs还是RBC(red blood cell) 分化所必需的，并能抑制HIV(human immunodeficiency virus) 的感染和器官移植排斥反应。但其在胚泡着床甚至整个生殖过程中的作用尚不十分清楚，仍需进行深入的研究。3、载脂蛋白（Apos）参与细胞内外脂类物质的运输，调节脂及脂蛋白的代谢。目前已研究发现Apo-AI等多种载脂蛋白在调节胚泡植入过程中起着重要作用。4、Galectin-1