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目的比较KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鳞癌细胞株对放射线和化疗药物(氟尿嘧啶和顺铂)的敏感性,并检测O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和生存蛋白(Survivin)在其中的表达情况。方法1.MTT实验检测KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鳞癌细胞株在不同浓度顺铂和氟尿嘧啶药物中的存活分数,并利用半数抑制浓度(IC50)值评估细胞株对化疗药物的耐受性;2.克隆形成实验检测KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鳞癌细胞株在不同剂量照射后的存活分数,并利用单击多靶模型拟合剂量存活曲线计算放射生物学参数D0、Dq、N、SF2以评价3株细胞系对放射线的敏感性;3.Western blot和q RT-PCR检测KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鳞癌细胞株中MGMT和Survivin的表达情况。结果1.KYSE-450、KYSE-70、TE-1细胞照射剂量存活曲线及其生物学参数:采用Graph Pad Prism 5.0进行细胞生存曲线的拟合,结果显示,随着照射剂量的增加,KYSE-450、KYSE-70、TE-1食管鳞癌细胞株的细胞存活分数都相应减少。上述结果表明,KYSE-70对放射线较为敏感,TE-1和KYSE-450对放射线均较为耐受。2.KYSE-450、KYSE-70、TE-1细胞在不同浓度DDP和5-FU中的剂量存活曲线及其IC50值:DDP和5-FU作用48 h,食管鳞癌细胞株KYSE-450、KYSE-70、TE-1在不同浓度化疗药物中细胞存活率具有明显差异,说明其对不同浓度化疗药物的耐受能力具有明显不同,而根据IC50计算软件计算出不同细胞株相对不同化疗药物的IC50值,也证实了食管鳞癌细胞株TE-1对化疗药物DDP(TE-1细胞对DDP的IC50值约是KYSE-70的9倍)和5-FU(TE-1细胞对5-FU的IC50值约是KYSE-70的133倍)较为耐受。与TE-1细胞的IC50值比较,差异均有统计学意义(F=199.9、157.9,P<0.05)。3.MGMT和Survivin蛋白在KYSE-450、KYSE-70、TE-1细胞系中的表达:TE-1细胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表达最高,其次是KYSE-70、KYSE-450。与TE-1细胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表达水平比较,差异均统计学意义(F=367.7、213.5,P<0.05)。4.实时荧光定量PCR验证:针对MGMT和Survivin在TE-1(耐受细胞株)和KYSE-70(敏感细胞株)中的表达情况,β-actin作为内参对照,使用实时荧光定量PCR对其表达差异进行验证。MGMT在TE-1细胞中,与KYSE-70相比表达高(5.47±0.32)倍;Survivin在TE-1细胞中,与KYSE-70相比表达高(2.73±0.26)倍,差异有统计学意义(t=24.63、6.84,P<0.05)。MGMT和Survivin的表达在TE-1中均高于KYSE-70,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.在用MTT实验检测TE-1和KYSE-70化疗敏感性的实验中,TE-1在顺铂和氟尿嘧啶中的IC50值高于KYSE-70(P<0.05),表明在化疗药物顺铂和氟尿嘧啶中,KYSE-70对其较为敏感,TE-1则较为耐受。2.在用克隆形成实验比较TE-1和KYSE-70对放射线的敏感性实验中,细胞生存曲线及各项参数均显示TE-1较KYSE-70对放射线耐受(P<0.05)。3.在用蛋白质免疫印记(Western blot)检测MGMT和Survivin在TE-1和KYSE-70的表达水平,结果显示TE-1细胞MGMT蛋白和Survivin蛋白表达最高,其次是KYSE-70、KYSE-450。4.在用实时荧光定量PCR检测MGMT和Survivin在TE-1(耐受细胞株)和KYSE-70(敏感细胞株)中的表达情况,结果显示MGMT在TE-1细胞中,与KYSE-70相比表达高;Survivin在TE-1细胞中,与KYSE-70相比表达高。5.MGMT和Survivin在对化疗药物和放射线耐受的细胞株中表达水平较高,在对化疗药物和放射线敏感的细胞株中表达较低,这为更好地研究食管癌放化疗耐受机制提供了实验依据。