背景:作为致死率高、术后易复发的泌尿系统肿瘤,膀胱癌的体外诊断一直是研究的热点。目前已有的膀胱癌检测微流控芯片装置,存在制备和操作复杂、检测时间长以及需要专用终端检测设备等问题。本文提出了一种应用于尿液中特异性肿瘤标志蛋白联合检测的微流控纸芯片,以实现对膀胱癌的便捷快速检测。材料与方法:基于层析原理和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的胶体金技术设计纸芯片,以联合检测尿液样品中的膀胱癌标志性蛋白核基质蛋白22(nuclear matrix protein 22,NMP22)和膀胱肿瘤抗原(bladder tumor antigen,BTA)。芯片结构采用玻璃纤维素膜、聚酯膜、硝酸纤维素膜、吸水纸通过喷蜡打印法制作并列的双通道组成,各部分通过具有支撑作用的底板连接。通过抗原抗体免疫反应的ELISA实验分别筛选出适合胶体金标记的NMP22和BTA抗体对,并实验探索胶体金标记的最佳pH值与抗体浓度;采用抗原标准品进行纸芯片的验证测试,然后使用病人尿液样品联合检测两种肿瘤标志性蛋白,以测试纸芯片的实际效果。结果:(1)喷蜡打印法的应用显著提高了纸芯片的制作效率,且石蜡能够有效隔离两个检测通道;(2)通过实验得到胶体金标记NMP22抗体的最佳pH为7.5,抗体用量为1.0μg/100μL;标记BTA抗体的最佳pH为7.7,最适宜抗体用量为0.8μg/100μL;(3)对11例膀胱癌患者尿液样品检测结果有10例样品呈阳性,而对10例正常人尿液的检测结果则全部为阴性,检测过程仅需1-3 min。结论:本文成功制备了用于联合检测尿液样品中两种膀胱癌标志物的纸芯片,借助胶体金免疫示踪法将检测结果以肉眼可见的清晰条带呈现,避免了对专用分析仪器的需求,同时具有制作简单、操作快捷、廉价便携等优点。本文研发的纸芯片成功实现了对膀胱癌患者尿液的阳性检测,提高了纸芯片在实际应用中的可行性,能够辅助使用者进行膀胱癌的自我检测。