长牡蛎Calbin和Tyrosinase基因的克隆及其在幼虫生长发育中的表达分析

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贝类养殖是我国海水养殖业中重要的一部分。贝类人工大规模养殖中关键环节是早期幼虫能否正常发育,这对幼虫变态和变态后生长率、存活率有很大影响,直接影响到生产效益,因此了解幼虫发育机制对于生产实践具有重要意义。长牡蛎(Crassostrea gigas)在我国沿海均有分布,以广东、福建较多,为南方沿海主要养殖品种之一,是重要的经济贝类。本文以长牡蛎幼虫为研究对象,分别对长牡蛎幼虫发育过程中神经发育相关的钙结合蛋白(CgCalbin)和初生壳形成相关的酪氨酸酶(CgTyrosinase)两个基因进行了克隆,分析了基因在牡蛎幼虫四个发育时期的时空表达特征,解析了可能的功能。从长牡蛎幼虫cDNA文库中获得CgCalbin序列,进行了序列分析比对并构建了进化树。通过Real time PCR发现该基因mRNA表达量在幼虫的担轮期及成体肝胰脏中最高。整装原位杂交结果显示CgCalbin的mRNA主要存在于担轮期幼虫的神经节部位,推断该基因与长牡蛎幼虫神经发育相关。根据D形幼虫与稚贝的消减文库信息,利用染色体步移法以及3’ RACE法在幼虫中克隆到CgTyrosinase全长cDNA序列。通过Real time PCR发现该基因在稚贝中表达最高,提示该基因可能与变态过程、早期贝壳形成有关。通过对上述两种基因的研究,分别探讨了长牡蛎幼虫神经发育相关、初生壳形成相关的基因及在幼虫中的表达分析,为研究贝类生长发育调控的分子机理提供了新的依据。
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