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本实验从田间玉米病叶片上分离到一株对玉米小斑病菌C小种有拮抗作用的细菌,命名为菌株A(菌种保藏编号为CGMCC No. 1982)。采用平板对峙法测定了菌株A对致病真菌的拮抗作用,所用的致病真菌皆为农业生产上的病原真菌,包括玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.Vasinfectum)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)、辣椒疫霉病菌(phytophora capsici)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenarium)、大蒜菌核病菌(Sclerotinia allii)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)。实验结果表明,菌株A对上述病原真菌均有一定的抑制作用,说明菌株A具有广谱抗病原真菌特性。通过菌落和菌体形态观察、生理生化测定及16S rDNA序列同源性分析,鉴定菌株A为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。将菌株A接种于LB液体培养基,30℃振荡培养48 h,用高速离心机12, 000 r/min离心5 min去菌体,上清液加入30 %饱和度的硫酸铵,4℃静置过夜后,12, 000 r/min离心25 min,取上清液,加入硫酸铵使达到60 %饱和度,4℃静置过夜后,12, 000 r/min离心25 min,得到拮抗蛋白粗提物。对拮抗物的性质及拮抗机理研究表明,菌株A产生的拮抗物质能耐高温(100℃,10 min),抑菌活性pH值范围为5.0-9.0,对紫外线、胰蛋白酶部分敏感,对蛋白酶K、氯仿敏感,说明该拮抗蛋白稳定性较好。初步研究显示:该拮抗物质对玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)的抗菌机制主要是使孢子不萌发或萌发异常,菌丝畸形,顶端及中部膨大、扭曲,细胞质分布不均匀。将得到的粗提物用Tris-HCl缓冲液悬浮,用同缓冲液透析脱盐,然后通过DE52离子交换层析、葡聚糖凝胶G-200柱层析进行纯化,旨在得到纯的拮抗蛋白,测其氨基酸序列。由于时间所限,拮抗蛋白的纯化、测序工作尚未完成,在以后的时间里,本实验室还将继续这方面的研究。