伤口愈合是外科领域中迫切需要解决的问题。近年来,白及多糖作为一种具有优良理化特性的活性材料受到国内外学者的广泛关注,在创面愈合具有广阔前景,是一个十分活跃的研究课题。目的本研究尝试复合益生菌,以植物乳杆菌为关键菌,设计一种新型氧化白及多糖水凝胶,该凝胶不仅优于传统白及多糖水凝胶,还能利用植物乳酸杆菌代谢产生的乳酸影响伤口生理微环境,为伤口愈合寻找新的解决途径。对氧化前后白及多糖的理化性质及结构进行分析;筛选复合水凝胶制备工艺和处方配比,并对复合水凝胶基本性能进行表征;从体内、体外多方面探究复合水凝胶的药效学作用,以评价复合植物乳杆菌的氧化白及多糖水凝胶敷料在创面愈合应用方面的潜力。方法1.提取纯化工艺获得精制白及多糖,并通过高碘酸盐氧化反应得到氧化白及多糖。利用红外光谱、核磁共振氢谱、总多糖含量以及分子量的测定对氧化前后白及多糖的理化性质进行表征。2.氧化白及多糖与壳聚糖通过氧化交联制得水凝胶。筛选氧化白及多糖制备水凝胶的最佳溶液浓度、用量比例以及交联温度,优化制备工艺。以氧化白及多糖-壳聚糖最优配比添加植物乳杆菌,获得复合水凝胶。并对水凝胶的红外光谱、扫描电子显微、流变学行为、溶胀率及p H值等理化性质进行测定分析。3.以伤口感染常见的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌为试验细菌。采用抑菌圈法和平板计数法探究复合水凝胶的体外抗菌作用。4.采用CCK-8法评价复合水凝胶对小鼠成纤维细胞（L929）的毒性作用,测定复合水凝胶的体外生物相容性。5.将复合水凝胶应用于小鼠背部全层皮肤缺损创面模型,以创面愈合率、伤口病理组织染色切片及血清炎症因子为观察指标,结合肝肾毒性评价,探究复合水凝胶对创面愈合的影响。结果1.白及多糖经苯酚-硫酸法测定其总多糖含量为69.23%。分子量测定结果表示,白及多糖的相对分子质量Mw和Mn分别为3.99×105 g/mol和7.09×104 g/mol。与白及多糖相比,氧化白及多糖于红外光谱1727.35 cm-1处出现加强的羰基（C=O）伸缩振动吸收峰,结合1H-NMR谱中δ9.2 ppm处出现的新的峰,表明白及多糖经氧化后其分子上的部分羟基变为醛基,提示氧化反应的成功。2.氧化白及多糖-壳聚糖水凝胶的最佳配比为2%（w/v）OBSP溶液与1.5%（w/v）CS溶液按质量比1:1,在48°C、200 rpm混合搅拌反应4 h。壳聚糖主链上伯胺基（-NH2）和氧化白及多糖上的羰基（C=O）发生缩水聚合反应生成亚胺键（C=N）,即生成了Schiff键形成水凝胶。衰减全反射红外光谱中羰基（C=O）的消失以及Schiff键（C=N）的特征吸收峰,揭示水凝胶的成功制备。SEM结果表明,该复合水凝胶具有三维多孔网状结构,有良好的物理强度。流变学表现出明显的频率无关性,是典型的水凝胶行为。溶胀平衡后,该复合水凝胶的吸水能力是自身重量的30-40倍。复合水凝胶的p H值在5.86-6.52之间,是一种呈弱酸性的伤口敷料。3.通过抑菌圈试验和平板计数试验,OBSP-CS-LP水凝胶较OBSP-CS水凝胶有更好的抗菌活性,抑菌率超过98%。OBSP-CS-LP水凝胶对三种伤口常见受试菌的抑菌率均有提高,能有效预防细菌感染。4.细胞毒性实验结果显示,不同浓度（0.625-10.000 mg/m L）复合水凝胶浸提液培养下的L929细胞存活率均高达75%。CCK-8结果展现了OBSP-CS-LP水凝胶良好的生物相容性。5.小鼠背部全层皮肤缺损实验结果表明,治疗7天后,复合水凝胶创面闭合率高,且痂皮自然脱落,14天后几乎完全愈合。病理组织染色切片发现,复合水凝胶能加快胶原沉积,减少瘢痕形成。酶联接免疫吸附剂测定血清因子结果显示,该水凝胶能促进VEGF因子的高表达,降低炎症反应,且无肝肾毒性。结论1.通过氧化交联法制备水凝胶,此方法不需要苛刻的条件,而且用高碘酸盐氧化法制备的双醛白及多糖是一种重要的改性多糖,不仅改善了水凝胶的机械性能,还避免了戊二醛等有毒交联剂的使用,适用于水凝胶益生菌传递系统的制备。2.以白及多糖为基质的水凝胶伤口敷料生物相容性好、毒性低和生物医药活性广泛,在天然高分子水凝胶材料方面性能优良,具有广阔的应用前景。3.面对伤口不愈对社会造成的沉重负担,伤口微环境的改造似乎是一种可行的策略。复合植物乳杆菌的白及多糖水凝胶,除了具有良好的抗菌活性外,植物乳杆菌代谢产物还能为伤口提供有益愈合的微酸环境。伤口中适宜的微酸环境能大幅度地抑制细菌生长,这对于伤口的快速修复是非常重要的。所以,复合植物乳杆菌的白及多糖水凝胶敷料更适合于伤口组织的修复。