神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,居颅内肿瘤发病率的首位。它除具有坏死病灶集中点、善于利用微环境来支持自身存活、生长迅速的特点外,还具有血管丰富,侵袭与转移能力强等特点。人们越来越认识到,在神经胶质瘤的治疗中,仅仅开发出简单的抑制肿瘤细胞增殖的药物是远远不够的,筛选出既能抑制肿瘤细胞增殖又能抑制肿瘤细胞转移的靶点清晰而又安全有效的药物,是目前神经胶质瘤药物研发的迫切需要和关键所在。甲酰肽受体(FPR)是一种G蛋白偶联受体,广泛分布于人体多种组织和器官,能参与介导白细胞趋化、免疫反应以及恶性肿瘤等多种病理生理过程。近年来研究发现,FPR能选择性表达于人恶性胶质瘤细胞系U-87及多数原代Ⅳ级恶性胶质瘤与Ⅲ级星形细胞瘤,在正常的星形胶质细胞及恶性程度较低的胶质瘤表面并不表达。该受体可以通过与宿主来源的FPR激动剂(由坏死的胶质瘤细胞释放的甲酰肽样物质)作用,介导人恶性胶质瘤细胞的迁移、存活、生长及血管生成,还能参与裸鼠的致肿瘤性。因此,FPR可以作为一个开发新型抗胶质瘤药物的分子靶点。基于此,本研究首先建立了甲酰肽(fMLF)诱导的U-87细胞体外趋化筛选模型,一种基于FPR的靶向筛选平台。然后应用该模型对一系列样品进行筛选,从中筛选得到能够抑制U-87细胞趋化的目标样品。然后,应用MTT法检测了目标样品对胶质瘤细胞的敏感性,从中筛选出能显著杀伤肿瘤细胞的目标样品。这样就以抑制肿瘤细胞增殖及迁移双方面进行筛选,得到了葡萄籽活性提取物F2。本文进一步考察了F2对人恶性胶质瘤U-87细胞FPR表达与活化效应的影响。研究发现,F2不能直接激活FPR,但F2能特异性干扰FPR的功能及其信号转导。本研究首次证明,F2可以有效抑制胶质瘤细胞的趋化,对胶质瘤血管生成具有潜在的抑制作用,还可以显著下调FPR的表达,提示F2具有开发成为新型抗胶质瘤药物的巨大潜力。接下来,进一步考察了F2对多种肿瘤细胞系的敏感性及其诱导人恶性胶质瘤U-87细胞的死亡机制。研究表明F2具有广泛的抗肿瘤谱,能显著抑制多种胶质瘤细胞的成活率,包括:人恶性胶质瘤U-87、U-251、Tj-899、Tj-905和大鼠脑胶质瘤C6。还能显著抑制人白血病细胞系HL-60、人肝癌细胞系Hep3B及人结肠癌细胞系Colon-205的成活率。对F2诱导的人恶性胶质瘤U-87细胞的死亡机制研究表明,F2诱导的U-87细胞死亡不同于坏死、凋亡及自噬,而是具有Paraptosis样典型特征。细胞经F2处理后,明显变圆,胞内出现许多大大小小的空泡,细胞膜仍保持完整,无凋亡小体的出现。信号通路研究表明F2能显著诱导U-87细胞ERK1/2及P38的磷酸化,而且F2能启动U-87细胞钙动员。该钙动员主要来源于细胞外钙,且可能有Gi蛋白的参与。另外,研究表明活性氧是介导F2细胞毒作用的重要机制。最后,本文研究了F2对人恶性胶质瘤U-87细胞的诱导迁移作用。研究表明,非细胞毒浓度的F2能显著诱导U-87细胞迁移,这样F2就能使肿瘤细胞向其高浓度区(细胞毒浓度区)迁移,进而发挥其细胞杀伤作用。而且F2诱导的U-87细胞迁移主要为趋化,但有轻微的化学激活。信号通路研究表明,非细胞毒浓度的F2能显著诱导U-87细胞ERK1/2磷酸化,且该过程中可能伴有Gi蛋白的参与。综上所述,本论文综合运用化学、细胞生物学、分子生物学和现代药理学技术手段,在分子、细胞水平,系统研究了F2的抗胶质瘤作用。结果表明,F2不仅能够显著杀伤胶质瘤细胞,非细胞毒浓度的F2还能显著诱导肿瘤细胞向其细胞毒浓度区迁移,进而更好的发挥其细胞杀伤作用。另外,非细胞毒浓度的F2还可以有效抑制胶质瘤细胞的趋化,对胶质瘤血管生成具有潜在的抑制作用,还能够显著抑制FPR的表达,提示F2具有开发成为新型抗胶质瘤药物的潜力。