【摘 要】
：
木质素阻碍反刍动物对粗饲料的降解利用,实验室前期研究发现水牛瘤胃微生物具有降解利用木质素的能力,且分离的木质素降解细菌含有漆酶（木质素降解酶）的编码基因。为探索水牛瘤胃微生物降解木质素的潜力以及克隆表达的水牛瘤胃细菌源漆酶的酶学性质,本研究首先采集3头成年瘘管水牛的瘤胃内容物,通过宏基因组测序探索水牛瘤胃降解木质素相关的微生物、酶和通路;并利用实验室前期分离的2株水牛瘤胃源木质素降解细菌假中间苍白
【基金项目】
：
“十三五”国家重点研发计划项目“现代奶牛高效安全养殖技术应用与示范”（NO.2018YFD0501605）; “湖北省农业科技创新中心畜禽遗传改良及健康养殖技术团队”（NO.2019-620-000-001-30）
论文部分内容阅读
木质素阻碍反刍动物对粗饲料的降解利用,实验室前期研究发现水牛瘤胃微生物具有降解利用木质素的能力,且分离的木质素降解细菌含有漆酶（木质素降解酶）的编码基因。为探索水牛瘤胃微生物降解木质素的潜力以及克隆表达的水牛瘤胃细菌源漆酶的酶学性质,本研究首先采集3头成年瘘管水牛的瘤胃内容物,通过宏基因组测序探索水牛瘤胃降解木质素相关的微生物、酶和通路;并利用实验室前期分离的2株水牛瘤胃源木质素降解细菌假中间苍白杆菌和蜡样芽胞杆菌的全基因组序列,挖掘到5个漆酶基因,以大肠杆菌BL21（DE3）菌株为宿主构建重组表达菌,探究重组漆酶的酶学性质,为水牛瘤胃源木质素降解酶的开发和耐粗饲机理的研究提供科学参数。主要研究结果如下:1、宏基因组学分析结果表明,水牛瘤胃具有丰富的木质素降解细菌、酶和代谢通路,待开发程度较高。（1）水牛瘤胃中与木质素降解相关的微生物主要来自拟杆菌属、普雷沃氏菌属、丁酸弧菌属、纤维杆菌属、真杆菌属等。（2）水牛瘤胃中最丰富的碳水化合物酶是糖苷水解酶,发现了多种木质素降解酶,主要包括漆酶、过氧化物酶、阿魏酸酯酶等。（3）水牛瘤胃中最主要的代谢方式是碳水化合物的代谢和氨基酸的代谢,发现了多条木质素降解相关代谢通路,主要包括木质素分解代谢过程、苯丙氨酸代谢、苯甲酸盐代谢、芳香族化合物代谢过程等。2、水牛瘤胃蜡样芽孢杆菌源的重组漆酶Lac3833能够降解木质素磺酸钠。将假中间苍白杆菌中的2个漆酶（lac01691、lac03031）基因和蜡样芽孢杆菌中的3个漆酶（lac3833、lac1866、lac118）基因分别连接到p ET28a（+）载体并最终转化至BL21（DE3）菌株,构建了5株原核表达菌。克隆表达及酶学性质研究结果表明:（1）通过不同异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓度和温度梯度诱导表达的5个重组漆酶,仅Lac01691和Lac3833可溶性好、表达量高。Lac01691的最佳表达条件为16℃和0.4mmol/L IPTG,Lac3833的最佳表达条件为16℃和0.2mmol/L IPTG。Lac01691的咪唑最佳洗脱浓度范围为60mmol/L到180mmol/L,Lac3833为40mmol/L到160mmol/L。（2）Lac3833的酶活性显著高于Lac01691,在2,2-联氮-二-3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸-二铵盐（ABTS）、2,6-二甲氧基苯酚（2,6-DMP）和愈创木酚3种底物下,Lac3833发挥酶活性的最适温度均为40℃。当底物为ABTS和2,6-DMP时,Lac3833在p H4.5时的相对活性最高;当底物为愈创木酚时,Lac3833在p H5.5时的相对活性最高。Lac3833在40℃的稳定性优于45℃,在p H值为5.0的缓冲液中的稳定性优于4.0和4.5,反应24h后对木质素磺酸钠的最高降解率为8.39%。综上所述:（1）宏基因组学分析揭示了水牛瘤胃木质素降解微生物主要来自拟杆菌属、普雷沃氏菌属、丁酸弧菌属等,其中含有漆酶、氧化酶等木质素降解酶的编码基因。（2）以BL21（DE3）菌株为异源宿主表达的水牛瘤胃源蜡样芽孢杆菌漆酶Lac3833,可溶性好,表达量高,具有较好的温度和p H稳定性,能够降解木质素磺酸钠。
其他文献
走滑型地震在中国及邻区内部无论是在数量上、强度上还是分布面积上均占绝对优势;亚失稳阶段是断层失稳的最后阶段,包含着“必震”的信息;因此,开展走滑断层亚失稳阶段变形场演化特征的实验研究是地震地质科学和防震减灾工程的重要课题。为深入理解走滑断层亚失稳阶段变形场演化特征及影响因素,本文基于数字图像相关方法开展了断层粘滑实验研究,主要研究工作如下:（1）研制出一种适用于断层粘滑模型实验的相似材料,其能放大
1992年,美国友邦保险公司作为新中国成立以来第一个进入中国的外国保险公司,将保险代理人制度带入中国保险市场,开启了一个新的时代。其产生的业绩极大地触动了当时的国内保险公司,随后各家保险公司纷纷效仿,自此我国保险业进入了高速发展的黄金时期。截至2020年底,我国保险代理人队伍已经扩张到900多万人,保险业的年度承保保费规模已经达到了 45,257亿元,我国保险行业进入了大发展、大繁荣阶段。与此同时
小学语文教材每单元都序列设计了核心语文要素，从三年级至六年级每册都编排了阅读策略单元。在“学习提问”策略单元中，“提问”这个语文要素的落实，需认识学习提问的价值所在，并借助本单元的教材特点，设计有意义的学习活动，从而引导学生掌握提问方法，建构提问图式，有效促进学生思维品质的发展。
近年来,历史学科核心素养成为了教育教学研究领域的热门话题之一,也引起了中学历史教师的极大重视,但是其中的“时空观念”素养无论是在学术研究方面,还是在高中历史教育实践方面,仍然存在着诸多问题,“时空观念”素养相关学术研究中的落实策略不够具体、不够系统,中学历史教师在教育实践中不够重视“时空观念”素养的落实,几乎不会对其进行专门的教学设计,导致学生的“时空观念”未能得到很好的培养。因此,如何提升学生的
砂岩储层中由流体注入导致的地震活动与砂岩断层（裂隙）的摩擦行为有关。为了揭示不同温度条件下含流体砂岩裂隙的摩擦特性，在温度范围为25～140℃和有效法向应力范围为4～12MPa的试验条件下，本文分别对干燥、水饱和以及注CO2锯切砂岩裂隙进行了速度分级加载试验。试验结果表明：（1）对于干燥砂岩裂隙，增大有效法向应力和升高温度均能增大裂隙的初始摩擦系数，而改变有效法向应力对裂隙摩擦稳定性影响不明显，仅
心理契约是小微企业人力资源管理的重要方法之一，对小微企业的运行与发展壮大有着重要的价值。从心理契约视阈来看，小微企业在管理过程中存在着对心理契约重视程度不够，人力资源管理体系不完善，心理契约违背处理机制不完善等问题。这些问题的解决需要小微企业加强对心理契约的重视程度，在管理过程中加强与员工的沟通，建立管理过程中的预警机制。
为了探究细菌混合协同降解阴离子型聚丙烯酰胺（HPAM）机理，作者以球红假单胞菌和枯草芽孢杆菌等体积混合构成混合菌，研究了单个菌株和混合菌的生长情况及降解特性。同时采用分子对接模拟了红球菌N-771酰胺酶（Rh Amidase）和枯草芽孢杆菌漆酶（Lac）与HPAM结构模型的结合。试验结果表明，枯草芽孢杆菌含有内生孢子，其适应环境的能力比球红假单胞菌强，而且2种菌株都含有鞭毛，运动剧烈。在温度35℃
目的 分析2017―2020年深圳市居民的主要伤害死亡特征及减寿情况，为制定伤害预防控制策略和措施提供科学依据。方法 使用构成比、死亡率、标化死亡率、潜在减寿年数（potential years of life lost, PYLL）、减寿率（potential years of life lost rate, PYLLR）、平均减寿年数（average years of life lost, A
在"双减"的背景下,英语的学习也会因此而受到影响。"双减"政策的推行,降低了小学生英语作业的完成时间,减少了家庭作业。因此,在英语教学中,如何有效地促进学生的学习,是非常有意义的。教师应把作业与课堂教学相结合,以提高学生的学业水平。教师在课堂上对知识进行了全面的解释,而不再给学生施加压力,使他们无法在课堂上解答。本文从英语作业的编排出发,对"双减"大环境下英语课堂教学策略的运用进行了探讨。
城市建设和城市发展离不开土地资源，权衡城市发展水平的重要的指标中，土地利用变化与生态环境变化指标尤为重要。对2016年和2021年两年的Landsat8的影像数据资料图像和2006年—2021年间的DEM影像进行分析。对深圳市的土地利用与生态环境变化进行了分析研究，并探讨了使其变化的驱动因素。结果表明，2006年—2021年期间，建设用地占比较大且显著增加，耕地、林地、水体所占比例逐年减少，未利用