鸡防御素是一组小分子量的阳离子多肽,因其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌及病毒都能产生杀伤作用且不易产生耐药性成为研究热点。为了初步探讨鸡防御素的部分生物学活性,本研究在已成功克隆出鸡β-防御素-2(Gal-2)表达质粒的基础上,成功表达纯化得到重组Gal-2后,进行了体外抑菌活性、淋巴细胞转化增殖、免疫器官指数等活性检测,为大量获取Gal-2和将其用于生产上打下基础。结果如下:对已克隆转化的工程菌pMAL-c2X-Gal-2在大肠杆菌中的诱导表达条件进行了优化,选择出最佳诱导条件为:在15℃,宿主菌A600为1.0,IPTG浓度为0.8mmol/L条件下诱导8h时获得高水平的表达。IPTG诱导表达的蛋白经Amylose树脂亲和纯化后,BCA法测定纯化样品的浓度,再用Factor Xa切割因子切割纯化的样品,再经Amylose树脂亲和纯化,后经SDS-PAGE检验纯化样品。结果显示,纯化出的样品为MBP-Gal-2融合蛋白,SDS-PAGE电泳与灰度扫描显示在50KD位置有一条明显的诱导表达条带,该重组蛋白表达量占菌体总蛋白的36.24%,表达的融合蛋白以可溶性的形式存在,纯化后的融合蛋白的浓度可达到0.468mg/mL。但是经切割再过柱纯化后SDS-PAGE条带上只见MBP-Gal-2和MBP,未见Gal-2。以对数生长中期的大肠杆菌为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖扩散法测定重组Gal-2的抗菌活性,并对其在20℃~100℃及pH4~pH10条件下是否还具有抗菌活性进行检测。结果表明:重组Gal-2对大肠杆菌有抗菌活性。此外,其在20℃~ 100℃及在pH4~pH10条件下仍具有抗菌活性。体外培养雏鸡外周血淋巴细胞,运用MTT法研究不用浓度MBP-Gal-2对淋巴细胞增殖功能的影响。结果发现:中剂量的MBP-Gal-2(100μg/mL)促进LPS或PHA-P刺激的雏鸡外周血淋巴细胞的增殖,并与剂量呈正相关。但高剂量的MBP-Gal-2(200μg/mL)抑制外周血淋巴细胞的增殖。体内动物实验法,研究了重组Gal-2对淋巴细胞转化增殖功能的影响。结果发现:除第10d实验组与对照组相比差异显著外,其他组差异不显著。体内动物实验法,还研究了重组Gal-2对雏鸡免疫系统相关指数的影响。结果发现:重组Gal-2对加强免疫系统的免疫功能有一定的促进作用。由上述实验结果表明:重组Gal-2不论在抑菌活性上还是在免疫系统反应上,都具有较强的生物学活性,本试验为重组鸡防御素生物学功能的深入研究和应用提供了理论参考。