第一部分 高效液相色谱法同时测定粮食中四种真菌毒素新方法的建立　　目的：建立同时提取、分离、检测粮食中黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1，AFG1)、伏马菌素B1 (Fumonisin B1，FB1)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin，OTA)及杂色曲霉毒素（Sterigmatocystin，ST）的高效液相色谱(High performance liquid chromatography，HPLC)新方法，为粮食产品的质量安全控制提供依据。　　方法：采用双三元高效液相色谱技术，结合在线衍生及双检测器联用技术，同时对4种真菌毒素进行分析。该方法每次进样分析序列包含2个分析方法，方法一：不经过在线衍生直接进样，经色谱柱分离后依次进入二极管阵列检测器（Diode-array detector，DAD)和荧光检测器（Fluorescence detection，FLD)检测器，其中ST在DAD中完成定量检测，AFG1和OTA在FLD中完成定量检测。方法二：经在线衍生后进样，FB1经衍生后在FLD完成定量检测。通过该种方法完成对4种毒素的同时分离、检测。随后将采集到的粮食样品粉碎，使用QuEChERS盐包同时提取4种真菌毒素，提取液经PRiME HLB固相萃取小柱净化后，运用上述方法对样品进行分析。　　结果：FB1在0.10～5.00ug/ml范围内呈良好线性，线性方程Y=1.00x106X-158792; R2=0.9981。平行测量7次，获得相对标准偏差（relative standard deviation，RSD) =1.03%，检出限0.03μg/ml，对粮食样品加标后进行检测，测得其加标回收率为69.10%～81.70%。其余3种毒素的各项指标如下：AFG1线性范围12.50～400ng/ml，线性方程Y=1259.40X-860.59; R2=1.0000。RSD=0.60%，检出限1.90ng/mL，加标回收率为71.00%～72.90%。OTA线性范围为15.60～500ng/ml，线性方程Y=4970.60X-20651; R2=0.9989。RSD=3.10%，检出限0.48ng/ml，加标回收率82.40%～84.40%。ST线性范围15.60～500ng/mL，线性方程Y=0.08X-O.11; R2=1.0000。RSD=0.23%，检出限1.50ng/ml，加标回收率64.00%～65.60%。该方法成功地应用到邯郸市磁县采购的11份粮食样品的检测，未检出毒素。　　结论：该方法准确、灵敏、快速、简单，实现了粮食中4种真菌毒素的同时提取、分离、检测。运用于实际样品的测定，结果令人满意。　　第二部分 四种真菌毒素对BRL细胞联合毒性作用类型及机制研究　　目的：通过细胞生物学方法，评价4种真菌毒素的联合作用，探讨是否可以对BRL细胞的增殖、凋亡产生影响。　　方法：分别将不同浓度AFG1、OTA、FB1和ST与BRL孵育48h后，采用CCK-8法评价单一真菌毒素的细胞毒性。通过绘制剂量-效应关系曲线及运用Design-Expert 8.0.6软件运行中心组合设计等方法，研究4种真菌毒素对BRL细胞的联合毒性作用模型。随后通过Hochest 33258、流式细胞术等技术测试反映细胞凋亡有关的指标，探明真菌毒素间可能的联合毒性作用机理。　　结果：四种毒素单独作用于BRL细胞时均具有细胞毒性，降低细胞活力的效应呈浓度依赖式。最终确定4种毒素之间的相互作用模型，Y48(%)=-2774.96+343.61×ST+82.31×OTA+11.82×FB1+133.07×AFG1-0.51×OTA×FB1-274.70×ST2-2.27×OTA2-0.17×FB12-2.19×AFG12。 0TA与FB1两种毒素之间存在中度协同作用，CI值分别为0.74，0.71，0.66。两者协同作用抑制BRL细胞的增殖并诱导凋亡。　　结论：粮食中这4种真菌毒素共存时比单独作用产生更大的肝毒性，提示需要更加深入的研究真菌毒素的毒理学相互作用，以期更加准确的评估其健康风险。