辣椒叶片中类胡萝卜素组分分离及测定方法研究

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以陇椒3号辣椒为试验材料,通过对提取溶剂、皂化温度、皂化时间、KOH-乙醇皂化液质量浓度、KOH-乙醇皂化液体积和料液比的选择,及对流动相、柱温和柱流速等色谱条件的考察,研究提取辣椒叶片中类胡萝卜素工艺和色谱条件,建立了辣椒叶片中叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素3种类胡萝卜素组分分离及其含量测定的反相高效液相色谱-二极管阵列检测器(RP-HPLC-DAD)分析方法,为进一步研究影响辣椒品种耐低温弱光性的主要类胡萝卜素组分提供了方法保证。主要研究结果如下:1.通过对提取溶剂、皂化温度、皂化时间、KOH-乙醇皂化液质量浓度、KOH-乙醇皂化液体积、料液比的研究,建立了皂化提取辣椒叶片类胡萝卜素的技术工艺。皂化提取的技术关键是:以石油醚为提取溶剂、皂化温度为80℃、皂化时间为40min、皂化液质量浓度为20%、皂化液体积为10ml、料液比为1:5。2.在研究分离、测定辣椒叶片类胡萝卜素的流动相、柱流速、柱温、检测波长等色谱条件及C18柱和C30柱分离效果的基础上,建立了辣椒叶片中叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素等3种类胡萝卜素组分分离及其含量测定的反相高效液相色谱-二极管阵列检测器(RP-HPLC-DAD)分析方法。适宜色谱条件为:色谱柱为YMC-C30(250mm×4.6mm i.d.,5μm);流动相A为乙腈:甲醇(体积比60:40),流动相B为甲基叔丁基醚;梯度洗脱程序:0min~15min(B由0%线性增加为42%),15min~20min(58%A+42%B),20min~25min(A由20%线性增加为100%);检测器为二极管阵列检测器(DAD);检测波长为450nm;柱流速为1.0ml/min;柱温为25℃;进样量为10μl。3.外标法定量考察表明,新建辣椒叶片中3种类胡萝卜素组分分离及其含量测定的高效液相色谱法科学可行。叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素各组分的浓度与峰面积的线性关系良好,相关性系数分别为0.9966、0.9999、0.9961;平均回收率在80%-98.9%之间。
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