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背景:随着社会压力的增加,乳腺癌的发病率呈逐年增长的趋势。在我国,乳腺癌发病率和死亡率分别位居女性恶性肿瘤发病率和死亡率的第1位和第5位,乳腺癌成为了严重影响女性身心健康甚至危及生命的常见肿瘤疾病。近年来,乳腺癌的发生发展呈现出年轻化趋势,乳腺癌引起研究者的广泛关注。研究发现,micro RNA(mi RNA)作为一类内源性非编码RNA在乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡中起重要作用,进一步研究mi RNA149-3p在乳腺癌细胞中的作用机理具有重要意义。目的:探究mi RNA149-3p在人乳腺癌细胞MCF-7中的作用机理。方法:(1)通过Taqman探针技术检测mi RNA149-3p在MCF-7细胞中的表达含量;(2)通过MTT实验检测不同浓度(25n M、50n M)mi RNA149-3p对MCF-7细胞增殖能力的影响;(3)通过实时无标记细胞分析技术(Real Time Cellular Analysis,RTCA)进一步验证mi RNA149-3p对MCF-7细胞增殖能力的影响;(4)通过细胞划痕修复实验检测mi RNA149-3p对MCF-7细胞迁移能力的影响;(5)通过流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI双染实验)检测mi RNA149-3p对MCF-7细胞凋亡的影响;(6)在基因水平上通过实时定量PCR实验(Real-time PCR实验)探究mi RNA149-3p对MCF-7细胞中炎症相关基因表达水平的影响;(7)通过蛋白印迹实验(Western Blot实验)探究mi RNA149-3p对MCF-7细胞在蛋白水平的影响;(8)统计学分析:数据使用SPSS 24软件进行统计学分析,数据表示为平均值±标准差,组间差异使用t检验分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:(1)MTT实验结果显示,转染25n M、50n M mi RNA149-3p后MCF-7细胞的增殖能力均受到明显抑制(转染25n M mi RNA149-3p后OD值从0.925±0.072降低至0.639±0.063,转染50n M mi RNA149-3p后OD值从0.610±0.014降低至0.461±0.049,P<0.05);(2)RTCA实验结果显示,转染mi RNA149-3p后MCF-7细胞的增殖能力受到了抑制(细胞指数从5.953±1.252降低至4.805±0.295,P<0.05);(3)细胞划痕修复实验结果显示,mi RNA149-3p能显著抑制MCF-7细胞的迁移能力,通过Image J软件对其划痕的闭合率进行分析,其结果具有统计学意义(P<0.05);(4)细胞凋亡实验(Annexin V-FITC/PI双染实验)结果显示,mi RNA149-3p对MCF-7细胞凋亡的影响无统计学意义;(5)Real-time PCR实验结果显示,过表达mi RNA149-3p能使MCF-7细胞中TNF-α、INF-γ、IL-6、IP-10、i NOS和IL-8等炎症相关基因表达水平受到显著抑制,同时,mi RNA149-3p也能显著抑制TNF-α诱导的MCF-7细胞炎症反应中炎症相关基因的高表达;(6)Western Blot实验结果显示,过表达mi RNA149-3p对MCF-7细胞中AKT蛋白的磷酸化(p-AKT表达量)有一定的抑制作用,对AKT信号通路下游的p21、p27蛋白有一定的激活作用;同时,TNF-α诱导的MCF-7细胞炎症反应中p-AKT表达量显著上调,而过表达mi RNA149-3p能明显抑制TNF-α诱导的炎症反应中AKT蛋白的磷酸化(p-AKT表达量)。结论:(1)mi RNA149-3p能抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移,但对细胞凋亡无影响;(2)mi RNA149-3p能抑制人乳腺癌细胞MCF-7中炎症相关基因的表达;(3)mi RNA149-3p能抑制人乳腺癌细胞MCF-7中AKT信号通路。