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速激肽是一类结构保守的小分子肽,羧基末端有共同的特异性序列:Phe-X-Gly-Lue-Met-NH2,家族成员包括SP、NKA、NKB、NPK和NPγ。速激肽家族作为易识别的兴奋性神经递质广泛分布于哺乳动物外周和中枢神经系统中。速激肽通过三种神经激肽受体NK1R、NK2R和NK3R发挥其生物性功能,这三种受体均属于G蛋白耦联受体家族。许多研究表明速激肽及其神经激肽受体参与多种癌症的发生和发展过程。之前的研究得出SP及其受体NK1R在多种肿瘤中呈现高表达。与NK1受体结合后,SP诱导肿瘤生长、血管生成和肿瘤的迁移(转移和侵袭)。前期研究报道许多神经激肽受体拮抗剂如L-733,060,阿瑞匹坦,L-732,138和MEN 11467能够抑制特定肿瘤细胞的增殖。但是目前为止只有阿瑞匹坦作为止吐剂被用于临床,而且有望成为一种广谱的抗肿瘤药。近期研究表明NKA水平上升是中肠转移性神经内分泌瘤的一个重要的预后指标,低水平的NKA可以显著改善其预后治疗,中肠神经内分泌肿瘤患者血浆中NKA水平持续升高(>50 pg/m L)时,患者的短期生存率较低。尽管之前的研究表明NK1受体的拮抗剂可以通过凋亡或其他途径抑制某些肿瘤细胞的生长,但是迄今未见神经激肽受体1的拮抗剂SR140333和神经激肽受体2的拮抗剂SR48968对结肠癌作用的相关研究报道,因此本论文旨在研究神经激肽受体1的拮抗剂SR140333和神经激肽受体2的拮抗剂SR48968对结肠癌细胞的细胞毒性作用。在本研究中,我们选用了6种结肠癌细胞系(HCT-116细胞、SW480细胞、SW620细胞、HT-29细胞、CT-26细胞和RKO细胞)来研究SR140333和SR48968抑制结肠癌细胞增殖的作用,并在HCT-116细胞系对其作用机制进行了研究。实验结果显示SR140333和SR48968可以剂量和时间依赖地抑制HCT-116细胞的增殖,其对6种结肠癌细胞系增殖的抑制效果具有选择性。我们进一步研究了SR140333和SR48968抑制结肠癌细胞增殖的分子机制。Hoechst 33342染色实验结果显示SR140333和SR48968处理后,HCT-116细胞出现了明显的细胞凋亡特征,如染色质凝聚、细胞膜完整性丢失、出现凋亡小体等,流式细胞术实验检测细胞凋亡结果进一步表明细胞凋亡是SR140333和SR48968诱导细胞死亡的主要机制。另外,流式细胞术检测细胞周期分布结果表明两种神经激肽受体的拮抗剂SR140333和SR48968可以剂量依赖地将HCT-116细胞周期显著地阻滞在G0/G1期。在SR140333处理后,Western Blot实验检测SR140333抑制了磷酸化ERK1/2蛋白在HCT-116细胞中的表达。而钙流实验则显示SR140333可以引起HCT-116细胞内迅速而强烈的钙信号,相反,SR48968作用HCT-116细胞后,细胞内的钙信号没有明显的变化。在小鼠体内实验中,将SR140333和SR48968以10 mg/kg每两天原位注射到CT-26荷瘤小鼠模型中,直到第14天,发现两种拮抗剂均明显抑制了肿瘤的生长。综上所述,神经激肽受体1的拮抗剂SR140333和神经激肽受体2的拮抗剂SR48968在体内和体外均可以抑制结肠癌细胞的增殖,HCT-116细胞对SR140333最为敏感,SW480对SR48968最为敏感。SR140333抑制结肠癌细胞增殖的机制为诱导细胞周期阻滞和凋亡,激活AKT和Ca2+信号通路,抑制MEK-MAPK信号通路。而SR48968是通过诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期在G0/G1期来抑制细胞增殖的,与钙信号途径无关。后续通过更深入的研究,有望将神经激肽受体拮抗剂SR140333和SR48968开发成新的治疗特定类型结肠癌的新药。