目的:观察成年小鼠视网膜Müller细胞在神经干细胞培养条件下是否可分化为神经干细胞,并对Müller细胞源神经干细胞的分化能力进行检测。方法:采用组织块贴壁培养法分离培养小鼠视网膜Müller细胞,利用Müller细胞在生长过程中贴壁牢靠的特点进行反复胰蛋白酶消化和多次培养的方法使其纯化。采用P3代细胞,利用免疫细胞化学染色检测Müller细胞标志物GS、Vimentin的表达情况。将所获得的P3代Müller细胞消化吹打成单细胞并调整密度为2×10~5/mL后,加入神经干细胞培养基(20ng/mL bFGF、20ng/mL EGF、B27)中培养,用神经干细胞表面标志物Nestin对诱导获得的神经球进行免疫细胞化学染色检测。利用血清诱导分化,观察神经球的分化能力,对分化形成的细胞分别进行免疫细胞化学染色检测,包括Müller细胞表面标志物GS、Vimentin,神经元细胞表面标志物β-tubulin III、MAP2ab,星形胶质细胞表面标志物GFAP,少突胶质细胞表面标志物RIP,无长突细胞表面标志物Syntaxin,双极细胞表面标志物PKCα的表达情况。结果:1.视网膜组织块培养法可以有效获得Müller细胞,Müller细胞早期呈簇状生长,细胞呈长梭形。P3代Müller细胞免疫细胞化学染色显示GS、Vimentin呈阳性反应。2.P3代Müller细胞在神经干细胞诱导培养基中培养3~5天后细胞逐渐聚集形成“桑葚状”球形结构,免疫细胞化学染色检测表达Nestin。3.Müller细胞源神经干细胞在含血清培养基中培养7天后,细胞转为贴壁生长,呈多种形态,免疫细胞化学染色显示GS、Vimentin、β-tubulin III、MAP2ab、GFAP、RIP、PKCα呈阳性反应。结论:1.视网膜组织块培养法可以有效获得大量高纯度的Müller细胞。2.体外利用无血清悬浮培养法,可将小鼠视网膜Müller细胞诱导分化形成神经干细胞。3.Müller细胞源神经干细胞体外诱导可分化形成新生胶质细胞和神经元。