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目的：探讨PNPLA3基因1148M多态性在体外培养肝细胞中的作用机制。方法：对经典的两步灌流法进行简化,经下腔静脉灌流,脉冲式灌注；对肝细胞分离液进行低速离心纯化；预先用鼠尾胶原铺备培养瓶；台盘蓝染色鉴定细胞存活率；倒置显微镜观察细胞形态。PCR技术得到PNPLA3基因野生型和1148M突变型的完整编码序列,将序列克隆到载体质粒pEGH中,构建载体质粒pEGH-PNPLA3和pEGH-PNPLA3I148M;载体质粒pEGH-PNPLA3或pEGH-PNPLA3I148M与慢病毒包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRR和pMD2G共转染293T细胞,得到携带PNPLA3基因野生型和1148M突变型完整编码序列的慢病毒；两种慢病毒各自感染Huh-7细胞；Western blot检测Huh-7细胞中PNPLA3蛋白野生型和突变型的过表达情况。稳定过表达目的基因的细胞长至90%融合度时,消化裂解细胞,全自动生化分析仪检测细胞裂解液内脂质代谢相关产物。稳定过表达目的基因的细胞长至70%融合度时,加入终浓度为50μmol/L的辛伐他汀,24小时后,消化裂解细胞,全自动生化分析仪检测细胞裂解液内脂质水平。稳定过表达目的基因的细胞长至90%融合度时,消化细胞,流式细胞仪检测细胞周期。结果：改进后的分离方法得到了足够数量的肝细胞；台盘蓝染色示细胞活率大于90%；细胞形态与活力可稳定保持l周。成功构建慢病毒载体；荧光显微镜观察显示慢病毒有效感染Huh-7,经过筛选,细胞感染有效率超过95%；Western blot证实PNPLA3蛋白野生型和突变型成功过表达。与空病毒组相比,过表达PNPLA3基因的细胞内甘油三酯、总胆固醇、脂蛋白含量明显升高,转氨酶水平也明显升高,过表达PNPLA3基因1148M突变型的细胞内以上指标升高更明显。经过辛伐他汀处理24小时以后,空病毒组与过表达PNPLA3基因野生型的Huh-7细胞内的甘油三酯和总胆固醇的含量有显著下降,而过表达PNPLA3基因1148M突变型的Huh-7细胞内的甘油三酯和总胆固醇含量不降反升。在Huh-7细胞内过表达PNPLA3基因1148M突变型,改变了细胞的有丝分裂过程,使得异倍体(S期)和4倍体(G2/M期)增多,而二倍体(GO/Gl期)减少。结论：成功建立了一种简单的小鼠原代肝细胞的分离与培养方法。成功构建了PNPLA3基因慢病毒载体及Huh-7过表达PNPLA3细胞系。成功证实了PNPLA3基因1148M多态性可以独立引起体外培养肝细胞脂肪变性,降低体外培养肝细胞对辛伐他汀的敏感性。成功证实了PNPLA3基因1148M多态性可以改变体外培养肝细胞的生长周期。我们的研究结果对深入探索PNPLA3基因的作用机制具有重要意义。