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为探讨高迁移率族蛋白1A盒(high mobility group protein a-box, HMGB1A-box)的体内体外作用,本文通过克隆人HMGB1A-box的cDNA,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株并对其诱导表达纯化,通过探讨其对间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)的促分化作用观察其体外作用,将纯化产物备用。A-box体内作用研究,以胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA) Wistar大鼠模型为研究对象,在胶原造模4周后,HMGB1A-box纯化产物治疗组腹腔内注本室已纯化的HMGB1A-box纯化产物0.62mg/只大鼠,阳性对照组腹腔注射甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)1mg·kg-1,阴性对照组CIA组大鼠腹腔注射生理盐水,以上各组治疗频率皆为每周一次,连续治疗4周。每周记录大鼠踝关节肿胀程度变化,治疗4周后行病理学检查及X线摄片检查。根据优选合成的HMGB1基因序列设计引物,经RT-PCR扩增得到了261bp的DNA片段,经测序分析,与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了含融合蛋白的重组表达质粒。经诱导后细菌高表达A-box,表达量为总蛋白的45%。经层析柱纯化后,蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A-box。将A-box加入MSC培养体系中培养后,细胞活性无明显改变,但细胞碱性磷酸酶表达明显增高。所有造模大鼠均出现了关节炎症状,造模后关节炎评分为7.25±0.70,显著高于正常大鼠(0.00±0.00,P<0.01)。治疗4周后阴性对照组症状评分为(7.77±0.44,n=12),显著高于MTX组(6.25±1.03,n=12,P<0.05)和A-box组(6.12±0.99,P<0.01,n=12)。MTX组与A-box组无显著差异(P>0.05)。病理学分析显示,A-box组滑膜增生、血管新生和炎症评分分别为0.00±0.00,1.14±0.69和1.71±0.75,MTX组分别为0.71±0.48,1.57±0.78和].42±0.53,均低于显著低于阴性对照组(2.28±0.45,1.85±0.69,2.14±0.89,P<0.05)。A-box组未见滑膜增生,评分低于MTX组(P<0.05)；其它改变两组间无差异(P>0.05)。X线摄片评分分别为1.85±1.06,2.14±0.37和3.28±0.48,大小顺序为A-box组<MTX组<阴性对照组(P值均小于0.05)。成功构建了重组人HMGB1A-box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化。A-box对大鼠CIA治疗作用稍优于MTX,具有药物开发价值。