【摘 要】
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目的:探讨外源性HSP70能否通过形成HSP70-BAG3复合体,直接参与下调HIF-1α的表达,从而延缓肺血管重塑、降低肺动脉压力。方法:将新生大鼠随机分为对照组、HPH组、HSP70转染组与HSP70+BAG3RNAi转染组（BAG3抑制剂组）,每组再按观察时间点分为3天、7天及14天组,HSP70组经口气管插管转染Ad-HSP70-EGFP（增强型HSP70腺病毒载体）;HPH组和对照组:经
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目的:探讨外源性HSP70能否通过形成HSP70-BAG3复合体,直接参与下调HIF-1α的表达,从而延缓肺血管重塑、降低肺动脉压力。方法:将新生大鼠随机分为对照组、HPH组、HSP70转染组与HSP70+BAG3RNAi转染组（BAG3抑制剂组）,每组再按观察时间点分为3天、7天及14天组,HSP70组经口气管插管转染Ad-HSP70-EGFP（增强型HSP70腺病毒载体）;HPH组和对照组:经口气管插管转染Ad-CON-EGFP（空病毒载体）;HSP70+BAG3RNAi转染组（BAG3抑制剂组）:经口气管插管转染Ad-BAG3-EGFP（BAG3腺病毒载体）,将各实验组新生大鼠气管插管给药的第2日置于缺氧箱内建立HPH模型,对照组新生大鼠置于氧浓度为21%的缺氧箱内常规饲养。各组新生大鼠在相应的观察时间点检测RVSP,荧光显微镜观察并判断HSP70转染成功率,免疫组化检测各组新生大鼠肺组织HSP70、BAG3、HIF-1α的蛋白质表达水平,光学显微镜下观察肺血管重塑情况并计算MT%及MA%。结果:1)RVSP:与对照组相比,各实验组新生大鼠自造模第3天开始即有RVSP的升高,并随着缺氧时间延长RVSP逐渐增高,提示新生大鼠HPH模型造模成功;2)肺血管重塑:HPH组及HSP70+BAG3RNAi转染组自造模第7日即有明显肺血管重塑表现,且肺血管重塑指标MT%与MA%较对照组增高,差异有统计学意义（P＜0.05）,伴随缺氧时间的延长,于造模14天时肺血管重塑明显加重。HSP70组自造模第14天时才观察到较明显的肺血管重塑表现,MT%与MA%较对照组增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;3)HIF-1α表达情况:HPH组、HSP70+BAG3RNAi转染组的HIF-1α表达在造模各个时间点差异均无统计学意义（P＞0.05）,两组和对照组相比,在造模3天、7天及14天时表达增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;HSP70组的HIF-1α表达和对照组相比,在造模3天、7天时表达下降,差异无统计学意义（P＞0.05）,在造模14天时,表达明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;HPH组和HSP70+BAG3RNAi转染组在造模3天、7天及14天时HIF-1α表达水平组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;4)HSP70表达情况:造模3d、7d及14天时,HPH组HSP70的表达均明显高于对照组（P＜0.05）,而HSP70+HPH组在造模3d、7d时HSP70的表达水平较HPH组明显增高（P＜0.05）,提示腺病毒介导的HSP70成功转染至新生大鼠肺组织。造模14d时,HSP70+HPH组HSP70的表达与HPH组、HSP70+BAG3RNAi转染组组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）,提示随着转染时间延长,外源性的HSP70活性逐渐衰减;5)BAG3表达情况:各组BAG3表达水平与HSP70表达水平相同,提示在HPH新生大鼠肺组织中HSP70与BAG3为复合体,同时表达、共同作用于肺血管。结论:HSP70可以通过HSP70-BAG3复合体形成,直接调控HIF-1α表达,减轻肺血管重塑,降低肺动脉压力。同时,使用BAG3 RNAi后,HSP70对HIF-1α抑制作用减弱,HIF-1α在体内表达增加,加速了肺血管重塑,提高了肺动脉压力。
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