灵芝蛋白的提取、酶解及抗氧化性能研究

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灵芝[Ganoderma Lucidum]是一种营养和保健价值极高的药用真菌。现代科学证明其具有免疫调节,抗肿瘤,抗衰老,清除氧自由基,活血化瘀,抗凝血,降血糖及护肝的功效,已引起医药工业界和保健品行业不少专家的关注。本文主要研究了赤灵芝水溶性蛋白水提取工艺及优化、醇溶性蛋白醇提取工艺及优化、灵芝蛋白的酶解及酶解产物的理化分析检测和性能,这对新型药物及功能保健品的开发具有重要意义。本文主要研究内容及成果如下:1.灵芝蛋白水提取工艺优化研究根据所建立的响应面数学模型进行参数最优化选择,得出水溶性蛋白提取率最优的条件为:液料比34.4mL/g,浸提温度26.56℃,浸提时间8.87h,pH8.9。在此优化工艺下水溶性蛋白提取率的预测值为82.59mg/g,验证实验中实际测得水溶性蛋白提取率为81.35mg/g,预测值与实际值无显著差异。诸因素对水溶性蛋白提取率的影响大小顺序为:pH值﹥提取温度﹥提取时间﹥液料比,其中pH值的对试验指标的影响极其显著。2.灵芝蛋白醇提取工艺优化研究以赤灵芝为原料,采用乙醇提取醇溶性蛋白,并通过单因素实验和正交实验研究浸提时间、温度、pH、液料比及提取次数对醇溶性蛋白提取率的影响,确定赤灵芝醇溶性蛋白提取的最佳工艺。单因素实验表明,提取时间8h,液料比40mL/g,乙醇浓度70%,pH3.0,醇溶性蛋白含量最高。正交实验得出各因素对灵芝醇溶性蛋白得率的影响程度大小依次为:pH值>液料比>提取温度>乙醇浓度。优选出较优工艺条件:乙醇浓度60%,pH 2.5,液料比40 mL/g,提取温度65℃,提取时间8h,提取次数2次。在验证实验中实际测得醇溶性蛋白提取率为10.82%。3.灵芝蛋白酶解物的性能研究采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法考察灵芝蛋白,酶解灵芝蛋白,并检测灵芝蛋白酶解物的氨基酸成分及含量,考察灵芝蛋白及其酶解物的抗氧化性能。结果表明,灵芝蛋白液具有明显的抗氧化活性,且酶解后的灵芝蛋白液清除的羟自由基的能力和还原力都得到了增强。含灵芝蛋白4.2mg/mL的灵芝蛋白液的还原力同0.05mg/mL的Vc的还原力相当。随着灵芝蛋白浓度增加,清除·OH自由基的能力增强;当灵芝蛋白的浓度为0.28mg/mL时,其·OH自由基清除率为19.22%,且清除?OH自由基的能力与灵芝蛋白的浓度之间的关系可以用对数方程来描述。
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