红豆杉资源遗传多样性分析及南方红豆杉愈伤组织诱导体系的建立

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:conqerzhang
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红豆杉是国家一级保护植物,由于红豆杉含有具有重要的抗癌物质紫杉醇,红豆杉资源的保护面临着诸多困难。本研究从南方红豆杉资源的有效保护出发,以福建省武平县梁野山国家自然保护区的万亩南方红豆杉自然种群为主要材料,研究南方红豆杉群落的遗传多样性及其与其它类型红豆杉资源的关系,并建立其愈伤组织诱导技术体系,主要结果如下: (1) 南方红豆杉侧芽是诱导愈伤组织的最佳外植体。(2) 南方红豆杉愈伤组织诱导的最佳培养基为:B5+2,4-D 2.0mg/L +NAA 1.0mg/L +IAA0.2mg/L+LH 2.0g/L+AC 0.5g/L。(3) 红豆杉愈伤组织增殖的培养基:B’5+NAA 4.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+GA3 0.2mg/L+AC 0.5g/L+LH 2.0g/L,AC、LH和GA3三种物质一起使用,基本遏制了褐化的发生,可取得较好的效果。(4) 南方红豆杉RAPD分析的最佳技术体系为:25μl反应体积中,含200μmol/L dNTP,0.2μmol/L随机引物,30~100ng模板DNA,1.5U Taq DNA聚合酶。反应程序为:首先94℃预变性3.0 min;94℃变性1.0 min;36℃退火2.0 min,72℃延伸2.0 min,45个循环后,72℃延伸10.0 min。最后于4℃保存直至取出。(5) 在11个供试材料中,9个RAPD引物共扩增出398条带,多态性条带比率(PPB)接近27%,表明供试红豆杉材料之间的遗传基础较窄。(6) 依据RAPD分析数据,对红豆杉属植物品种间及种内的供试材料进行了聚类分析。在D=0.52时可将供试材料分为2类:第一类是栽培的西藏红豆杉和栽培的曼地亚红豆杉,第二类包括栽培的南方红豆杉和其他一系列野生的南方红豆杉;在D=0.67时将供试材料分成3个类群,进一步细分几个变种间的遗传差异,将栽培的南方红豆杉和野生的南方红豆杉区分开来;第三次等级划分(D=0.80)也突出了几个野生的南方红豆杉间(来自不同海拔)的差异。
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