目的:神经胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤,严重威胁人类的健康,迄今为止,尚无有效的治疗药物。各型胶质瘤中,以星形胶质细胞瘤最多,U87是其中一种胶质瘤细胞。雷氏大疣蛛是我国最近发现的蜘蛛新种,近几年大量实验研究表明雷氏大疣蛛毒素具有抗肿瘤的作用,对胃癌细胞、食管癌细胞和宫颈癌细胞等的增殖有抑制作用。但其具体抗肿瘤机制尚未完全阐明。本文探讨雷氏大疣蛛毒素诱导神经胶质瘤U87细胞凋亡的作用机制,并且分离纯化出具有抗肿瘤活性的较单一组分,使蜘蛛毒素成为抗癌药物的新靶点。方法:本研究以体外培养的胶质瘤U87细胞作为模型,用雷氏大疣蛛毒素作用于U87细胞,MTS法检测雷氏大疣蛛毒素对U87细胞的抗肿瘤作用。分别从细胞水平、分子水平来研究雷氏大疣蛛毒素对U87细胞的调控。细胞水平:通过倒置显微镜、Hoechst33258荧光染色观察U87细胞凋亡的形态学变化;利用流式细胞仪检测U87细胞凋亡情况。分子水平:Western-blot检测U87细胞凋亡过程中,MAPK通路中P-ERK、P-JNK、P-p38等各蛋白的表达,再分别加入ERK抑制剂、JNK/SAPK通路与p38通路信号转导通路阻断剂,用Western-blot检测相应蛋白的表达。分离纯化雷氏大疣蛛毒素,通过快速蛋白液相色谱方法分离雷氏大疣蛛毒素,得到A1^A9组分;经MTS法检测各组分对U87细胞增殖的抑制作用。得到的各个组分经浓缩、冷冻干燥、富集。得到的各个组分再经阳离子交换分离纯化,采用MTS法检测各个蛋白组分对U87细胞的抑制作用,测其半抑制浓度。结果:雷氏大疣蛛毒素作用U87细胞,诱导U87细胞凋亡,细胞形态发生变化,变得不规则,成多形性。诱导U87细胞凋亡过程中,MAPK通路中磷酸化ERK蛋白表达降低,磷酸化p38蛋白与JNK表达上调,分别加入各通路抑制剂PD98059、SP600125和SB203580后,P-ERK表达上调,P-p38、P-JNK表达均下调。雷氏大疣蛛毒素经分离纯化得到9个组分,经MTS法检测,组分6对U87细胞具有抗肿瘤作用。组分6再经阳离子交换分离,检测到其中6-5对U87神经胶质瘤细胞抑制作用较强,经测定其IC₅₀=10ug/mL,且毒性低,活性稳定。结论:雷氏大疣蛛毒素能明显抑制U87细胞的生长增殖,诱导细胞凋亡。激活p38-MAPK与JNK/SAPK-MAPK通路来发挥抗肿瘤作用。为其研发成为神经胶质瘤靶向调节药物提供理论依据。