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目的 单纯疱疹性角膜基质炎（herpetic stromal keratitis，HSK）是单纯疱疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus type 1，HSV-1）感染角膜引起的一种由CD44+T细胞介导的免疫病理性疾病。为了进一步探索HSK的免疫学发病机制，我们建立了HSK的复发感染模型，研究CD4+Th1细胞和Th2细胞分泌的细胞因子在HSK复发过程中在鼠角膜组织中的表达及外源性重组白细胞介素-10对复发性HSK的抑制作用；并采用HSK的原发感染模型，研究在HSK发病过程中，协同刺激分子CD28／CTLA-4：B7在鼠外周血中的表达以及阻断该协同刺激途径后对CD4+T细胞的活化和HSK发病的影响，为HSK的防治提供理论依据。 方法 第一部分： 制备复发性HSK的动物模型：首先经BALB／c鼠的角膜接种1×106PFU的HSV-1（Mckrae毒株），经鼠的腹腔注射入的抗病毒血清1ml（该血清中和HSV-1的半数有效剂量为1／640），使HSV-1潜伏于三叉神经节，建立起潜伏感染，然后用波长为302nm的紫外线B光照射鼠的角膜、诱导病毒激活，造成复发性HSK，用VERO细胞培养的方法检测HSK的复发率，裂隙灯显微镜下观察HSK的临床特征，组织切片检查角膜病理改变。用RT-PCR方法检测在HSK复发过程中Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-12）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）在鼠角膜组织中的表达水平并探讨其与HSK疾病程度之间的关系。 第二部分： 应用复发性HSK的BALB八鼠模型，于紫外线照射鼠角膜之前的6 h、照射当时及照射后第 2产＊＊上 d，将外源性重组 IL－101 gi注射到潜伏感染鼠的角膜组织中，研究是否影响HSK的复发及复发性HSK的疾病程度，是否影响鼠的迟发型超敏反应（DTll）能力；同时通过yERO细胞培养的方法检测鼠角膜内病毒滴度，用 ELISA方法检测角膜内 IL－6＊L－la含量，探讨IL八0对复发性HSK影响的可能机制。 第三部分： 将HSV八接种于BALB八鼠的角膜上建立原发性HSK动物模型，用RT—PCR方法检测在HSK发病过程中协同刺激分子CD28、CTLA—4、B7叶、B7－二在鼠的外周血中的表达，并研究其表达水平与HSK发生、发展之间的关系。 在鼠的角膜接种HSV一二的当时及接种后2及4 d，将外源性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原－4融合蛋白卜 T lylnphocyte－associated anh－sen－4 Ie，CTLA－4Ie乃00 ne，注射到鼠的腹腔内，以阻断CD28／CI？IA－’：m协同刺激途径，采用流式细胞仪检测cm－’ig在体内对on人ons＋T淋巴细胞增殖的抑制作用，并分析其对HSK疾病程度的影响。 结 果 第一部分： BALBO鼠的角膜接种HSV－1后第3 d的角膜表面泪液膜中检测出HSVJ复制，所有鼠均患急性上皮性角膜炎。角膜接种HSV—l后第7周时，抽样10只鼠检测HSV－1结果：角膜表面泪液膜均为阴性，而三叉神经节均为阳性，证实BALB／C鼠处于潜伏感染状态。处于病毒潜伏感染期的鼠和正常对照组的鼠接受了相同剂量的紫外线照射后，对照组鼠仅表现为轻微的角膜水肿及一过性角膜新生血管化，很快恢复正常，角膜擦拭液（泪液膜）内没有检测到病毒。实验组78．6％O5刀0)的鼠的角膜擦拭液内检测到病毒复制，即病毒的复发率为78．6％；复发性角膜感染表现为角膜基质炎，裂隙灯下可见角膜基质混浊及角膜新生血管化，少数伴有虹膜炎和睑缘炎；组织学检查可见角膜上皮层完整，基质内有大量的炎性细胞浸润，主 ·2· 要为淋巴细胞、巨噬细胞及中性粒．细胞，有的前房内可见大量炎性细胞渗 出。角膜基质混浊于紫外线照射后第3 d开始出现，7－14 d为角膜基质混 浊的高峰时间，而后逐渐下降，并持续经过四周；角膜新生血管化于紫外线 照射后第3 d开始出现，并且迅速加重，第7－28 d为角膜新生血管化严重 的时间。 检测在HSK复发过程中Thl型细胞因子和111’型细胞因子在鼠角膜 组织中的表达水平，结果显示：潜伏感染鼠经紫外线照射后，IFN－Y、 IL－12＊L－10和IL－4 InRNA在角膜组织中均有表达。其中，IFN－Y在 临床疾病发展过程中（病毒激活后3一 d）高表达，在疾病恢复期厂 d 后)表达减弱；IL＜ InRNA在病毒激活后的第3 d开始表达于角膜组织， 表达的高峰时间为第7－14 d，14 ’l后表达逐渐减弱，以稍低的表达水平平 行于IFN－Y的表达，与角膜基质混浊程度密切相关；IL－4 mRNA在病毒 激活后的第3＊4 d有明显表达，14 d后表达迅速下降，几乎接近于病毒激 活前的水平；IL－12 rnRNA是角膜组织内表达最丰富的细胞因子，在病毒 激活后的第3d即开始高表达，高表达持续经过整个观察期，平行于角膜新 生血管化程度。对照组鼠的角膜经紫外线照射后，IFN－Y和IL－4 mRNA 无表达；虽然IL叶 mRNA有明显的表达(第3d dL但表达水平明显低 于实验组汀＜o．01＊IL八 有微弱表达(第7J 山，表达水平明 显低于实验组瞩＜o＊＊。 第二部分：