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本研究包括以下两部分:实验一:LncRNA OIP5-AS1调控miR-410-3p/Wnt7b信号轴促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的作用目的:明确长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5-反义RNA 1(LncRNA OIP5-AS1)调控miR-410-3p/Wnt7b信号轴、Wnt信号通路促进成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的分子学作用机制。方法:以弗氏完全佐剂(FCA)建立佐剂型关节炎大鼠(AA)模型,取大鼠滑膜组织原代培养FLS。RT-qPCR技术检测LncRNA OIP5-AS1和miR-410-3p在FLS中m RNA表达水平;荧光原位杂交技术(FISH)检测LncRNA OIP5-AS1在FLS中的亚细胞定位;MTT法检测LncRNA OIP5-AS1干扰后对FLS细胞增殖能力的影响;RT-qPCR检测LncRNA OIP5-AS1、miR-410-3p、Wnt7b及Wnt信号通路下游关键因子β-catenin、C-myc、Cyclin D1、GSK-3β、SFRP4 m RNA表达水平的变化情况;免疫荧光技术和Western blotting技术检测Wnt7b及Wnt信号通路下游关键因子蛋白的表达的变化情况。结果:LncRNA OIP5-AS1在FLS中高表达,miR-410-3p呈低表达;FISH实验结果显示LncRNA OIP5-AS1主要分布于细胞质中;LncRNA OIP5-AS1干扰后FLS细胞增殖能力受到明显抑制;与模型组相比,LncRNA OIP5-AS1干扰后能够显著抑制LncRNA OIP5-AS1、Wnt7b、β-catenin、C-myc、Cyclin D1、p-GSK-3β(Ser9)/GSK-3β的m RNA/蛋白的表达水平,升高miR-410-3p的m RNA以及Wnt信号通路负调控因子SFRP4的m RNA/蛋白的表达水平。结论:LncRNA OIP5-AS1在干扰的状态下能够通过调节miR-410-3p/Wnt7b信号轴,调控Wnt信号通路,抑制FLS细胞增殖发挥生物学作用。实验二:威灵仙总皂苷(TSC)对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中LncRNA OIP5-AS1/miR-410-3p/Wnt7b信号轴的干预作用目的:阐明威灵仙总皂苷(TSC)对FLS中LncRNA OIP5-AS1/miR-410-3p/Wnt7b信号轴的干预作用。方法:MTT法检测TSC(0.5μg/m L、2.5μg/m L、12.5μg/m L、62.5μg/m L、312.5μg/m L、1562.5μg/m L)分别在12h和24h对FLS细胞增殖的影响;RT-qPCR检测最佳剂量TSC干预后LncRNA OIP5-AS1、miR-410-3p、Wnt7b及Wnt信号通路关键因子β-catenin、C-myc、Cyclin D1、GSK-3β、SFRP4 m RNA表达水平的变化情况;免疫荧光技术和Western blotting技术检测最佳剂量TSC干预后Wnt7b及Wnt信号通路下游关键因子蛋白的表达的变化情况;回复实验中,分别采用MTT法、流式细胞术检测最佳剂量TSC在LncRNA OIP5-AS1过表达状态下对FLS细胞增殖的影响。结果:TSC对FLS的细胞增殖具有抑制作用;与模型组相比,威灵仙总皂苷干预后能够明显降低LncRNA OIP5-AS1、Wnt7b、β-catenin、C-myc、Cyclin D1、p-GSK-3β(Ser9)/GSK-3β的m RNA/蛋白的表达水平,miR-410-3p的m RNA表达水平以及SFRP4的m RNA/蛋白的表达水平被显著上调;与模型组相比,LncRNA OIP5-AS1过表达后可明显促进FLS细胞增殖,显著升高G2/M期的细胞占比;TSC干预后可部分抵消过表达LncRNA OIP5-AS1对细胞增殖的促进作用。结论:威灵仙总皂苷抑制FLS过度增殖的作用,可能与下调LncRNA OIP5-AS1的表达,调控miR-410-3p/Wnt7b信号轴及Wnt信号通路有关。