幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种定植于人胃上皮组织引起胃炎、消化性胃溃疡和胃癌的呈螺旋状的病原菌。目前，临床根除Hp的手段主要是联合应用抗生素，但该菌感染的普遍性、耐药菌株的不断增加、较高的花费以及病人的低依从性等因素，限制了抗菌药物的疗效。因此，免疫防治正成为Hp防治的一个研究热点。 尿素酶是Hp主要的抗原成分。在Hp疫苗研究中，尿素酶，以其保护力、表面暴露和保守性等优势，占据支配地位。尤其是其UreB亚基，被证明可以刺激机体产生具有较好保护作用的免疫应答。但是，UreB分子较大，不易重组表达。另外，以重组UreB为抗原虽然可以诱使机体产生大量抗体，但这些抗体不能抑制尿素酶活性。而以线性表位为抗原所获取的抗体能够强烈抑制尿素酶活性。也有文献报道，抑制尿素酶活性可以清除和防御Hp。我们推测以UreB线性表位或其小片段为抗原来制备疫苗，免疫效果更好。此外，Hp通过突破胃粘膜上皮组织感染机体，必将其抗原暴露于粘膜，刺激上皮组织有效地分泌IgA以中和Hp的毒性。因此，刺激粘膜免疫系统产生免疫保护的最有效方式是直接接种抗原于粘膜表面而引起粘膜上皮分泌IgA抗体，该途径可以通过口服免疫实现。以乳酸乳球菌(L．lactis)为载体来递呈抗原已被证实能够有效地刺激粘膜系统产生特异性免疫应答，而保护性免疫应答不仅依赖于抗原及递呈载体，也强烈取决于抗原定位。抗原表面表达于L.lactis能够直接刺激肠道粘膜系统，更好地提供免疫保护效率。本研究以LJreB的E片段为抗原尝试构建展示表达E片段的L．lact&表面表达系统一L．lactis MGl 363(pAMJ399-spax-e)和L．lactisMGl363(pAMJ399-ca-e)，旨在探讨E片段能否更有效地诱生免疫保护，希望通过两种锚定片段(spax和ca)所构建的抗原表面表达系统的研究，为口服免疫的研究奠定基础。本研究内容如下： 1、设计引物分别从S. aureus Cowan I菌株基因组L．1actis MGl363菌株基因组中克隆出蛋白A锚定域序列spax和AcmA锚定域序列ca。 2、为构建靶蛋白表面表达载体，经单酶切(酶切Spe I位点)将spax序列融合到分泌型载体pAMJ399中，构建了共价型表面表达载体pAMJ399-spax；经分步酶切(先酶切Pst I位点，再酶切Sal I位点)将ca序列融合到分泌型载体pAMJ399中，构建了非共价型表面表达载体pAMl399-ca。 3、为将ureB基因P片段分别与上述两种表面表达载体融合，通过单酶切(酶切Bg Ⅱ位点)和双酶切(酶切Bgl Ⅱ位点和Pst I位点)构建了融合有ureB基因e片段的共价型表面表达载体pAMJ399-spax-e和非共价表面表达载体pAMJ399-ca-e。 4、对诱导后的重组大肠杆菌E coli JMl09(pAMJ399-spax-e)和 Ecoli JMl09(pAMJ399-ca-e)全蛋白及上清进行SDS-PAGE分析发现：诱导后的E coli JMl09(pAMJ399-spax-e)总蛋白中约42kDa的位置出现目的条带。随后，将pAMJ399-spax-e质粒和pAMJ399-ca-e质粒通过电转化法导入L．1actis MGl363感受态细胞中，获取了抗原E片段的乳酸乳球菌表面表达系统，L．1actis MGl363(pAMJ399-spax-e)和L．1actis MG1363(pAMJ399-ca-e)。