本研究主要探讨了内质网应激抑制剂牛磺熊脱氧胆酸(taurocholate ursodeoxycholic acid, TUDCA)对黄牛颗粒细胞增殖,卵母细胞体外成熟及体外受精(IVF)早期胚胎发育的影响,并初步研究其作用的分子机制,以进一步完善黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外培养的体系。本研究分为以下两部分。第一部分,研究了TUDCA对黄牛颗粒细胞生长、凋亡及内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)相关基因表达的影响,并用衣霉素(tunicamycin, TM)构建内质网应激途径细胞凋亡模型,探讨TUDCA对TM诱导的内质网应激途径导致细胞凋亡的抑制作用。结果发现：(1)黄牛颗粒细胞经不同浓度(0、500、1000、1500μmol/L)TUDCA体外培养后其生长特性及染色体倍性无明显变化(P>0.05),但1500μmol/L组的细胞凋亡率显著低于Oμmol/L对照组(P<0.05)；QRT-PCR的结果显示,ERS相关基因Grp78、Ire1、Chop和Bax的表达随着TUDCA浓度的增加均呈下调趋势,在TUDCA浓度为1500μmol/L时显著低于0μmol/L组(P<0.05),而Bcl-2的表达则呈显著地上升趋势(P<0.05); RT-PCR结果显示各浓度处理组无明显的XBP-1的mRNA剪接。(2)用不同浓度TM (0、100、500、1000ng/ml)处理黄牛颗粒细胞12h,随TM处理浓度增加,细胞凋亡率以及ERS相关基因Grp78、Ierl、Chop和Bax的相对表达量呈上升趋势,而Bcl-2的表达则呈下降趋势,当TM为500、1000ng/ml时,细胞凋亡率和Grp78、Ire1、Chop和Bax基因的相对表达量显著高于0ng/ml组(P<0.05),而Bcl-2的相对表达量显著低于0ng/ml组(P<0.05);且剪接体XBP-1s的mRNA水平随着TM浓度的升高而增加。(3)黄牛颗粒细胞经不同浓度TUDCA (0、500、1000、1500μmol/L)预处理24h后,再添加TM (500ng/ml)共同培养12h,发现当TUDCA为1500μmol/L时,细胞凋亡率以及Grp78ωIre1、Chop和Bax基因的表达显著低于阳性对照组(TUDCA=0μmol/L, TM=500ng/ml)(P>0.05);但Bcl-2的表达随着TUDCA浓度的增加则呈上升后下降趋势,在TUDCA为500、1000、1500μmol/L时与阳性对照组及空白对照组均差异显著(P<0.05)；剪接体XBP-1s的mRNA水平随着TUDCA浓度增加较阳性对照组逐渐减少。第二部分,探讨了TUDCA对黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响。首先,在黄牛体外卵母细胞成熟及IVF胚胎发育过程中,检测到XBP-1的mRNA的剪接,特别是在卵母细胞成熟培养12h、24h和IVF的4cel1、桑椹胚、囊胚时期,剪接体XBP-1s的条带明显。然后,在黄牛卵母细胞成熟培养过程中采用不同浓度TUDCA (0、500、1000、1500μmol/L)处理卵母细胞,发现当TUDCA为500μmol/L时与对照组相比,均显著提高了卵母细胞第一极体排出率及其随后IVF胚胎的分裂率与囊胚率(P<0.05)；基因表达检测结果显示,500μmol/L处理组的卵母细胞与对照组(0μmol/L)相比,Grp78、Ire1及Chop三个基因相对表达量均显著降低(P<0.05),而Bcl-2与Bax相对表达量均显著上升(P<0.05)；且剪接体XBP-1s的mRNA水平降低。另外,在黄牛IVF胚胎培养过程中分别添加不同浓度TUDCA (0、100、250、500、1000μmol/L),也发现500μmol/L TUDCA培养胚胎提高了胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数(P<0.05),同时降低了囊胚细胞凋亡率(P<0.05)；基因表达检测亦发现500μmol/L TUDCA培养胚胎可显著下调囊胚Irel和Chop的表达(P<0.05),并显著上调Bcl-2的表达(P<0.05),且也降低了剪接体XBP-1s的mRNA水平。上述结果表明：(1)适宜浓度(≤1500μmol/L)的TUDCA对黄牛颗粒细胞体外生长特性及染色体倍性无显著影响。(2)TM能促进Grp78、 Ire1、Chop、Bax基因的表达并抑制Bcl-2表达,同时提高了剪接体XBP-1s的mRNA水平,诱导黄牛颗粒细胞凋亡。(3)适宜浓度的TUDCA (1500μmol/L)可降低体外培养的黄牛颗粒细胞凋亡率,下调细胞内质网应激相关基因Grp78、Ire1、Chop、Bax,以及上调Bcl-2的表达,并降低剪接体XBP-1s的mRNA水平,从而抑制黄牛颗粒细胞的内质网应激反应。(4)黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育过程中,均存在内质网应激反应；在卵母细胞成熟培养液或胚胎培养液中添加500μmol/L的TUDCA,可以抑制内质网应激反应,有利于促进卵母细胞的成熟和胚胎的发育。