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实验一 胎儿酒精综合症发病机制的初步研究
目的：探讨微管蛋白折叠辅助因子B（Tubulinfolding cofactors B, TBCB）在胎儿酒精综合症（Fetal alcohol syndrome,FAS）发病机制中的作用。从 TBCB 对微管生物合成及动态平衡调节的角度入手，探讨FAS的发病机制。
方法：建立胎儿酒精综合症小鼠模型，在其发育过程中，通过行为学检测，明确其神经系统的损伤症状。用Nissl、Golgi 染色，检测P0新生小鼠大脑内神经元及树突棘数量、纤维轴突长度的变化；用透射电镜检测神经元胞体及纤维内部超微结构的改变；免疫荧光(Immμnofloμrescent,IF)、免疫印迹(Western Blot, WB)检测大脑内神经元标记物NeuN、树突标记物Map2、轴突标记物Smi、微管蛋白α-Tμblin及TBCB的表达变化，明确神经元、微管与TBCB的表达改变。定量逆转录PCR(Qμantitative Reverse Transcription PCR,qRT-PCR)检测TBCB的 mRNA 表达改变。
结果：与正常小鼠比较，FAS 新生鼠出生体重显著降低，解剖观察神经系统发育无明显异常。在其发育过程中，行为学检测显示，FAS 小鼠的本体感觉与运动协调能力的发育显著延迟，对新事物的探索能力降低，学习记忆能力明显下降。对新生鼠大脑神经元数量进行检测， Nissl、Golgi染色结果显示，FAS小鼠神经元数量与对照组无明显差异。对新生鼠大脑神经元胞体形态、结构进行检测，透射电镜发现FAS新生鼠大部分神经元的胞体、胞核的形态结构，以及细胞器的数量、形态结构均无明显异常。对新生鼠神经纤维形态结构进行检测，IF、WB显示FAS小鼠脑内轴突、树突标记物Smi、Map2的表达明显降低；电镜结果显示FAS新生鼠大脑皮质神经纤维纵切面内，平行排列的细长管状的微管结构几乎消失，核糖体、线粒体水肿并减少，但仍可见；横截面内微管空心圆状结构消失，呈现为絮状不规整结构。对新生鼠脑内TBCB及微管进行检测，IF显示二者在FAS新生鼠大脑运动区、杏仁核，以及丘脑的表达明显降低，WB显示二者在FAS新生鼠全脑的蛋白表达明显下降，qRT-PCR显示FAS新生鼠全脑内TBCB的mRNA下调。TBCB 与 α-tubulin 沿微管共表达，但共表达的区域及数量明显减少。
结论：TBCB在FAS新生鼠脑内表达下调，可能导致微管形态结构严重破坏，从而引起神经纤维病变，最终导致FAS小鼠神经发育障碍，表现出学习、记忆、感知、感觉能力的发育迟缓。
实验二 脑外伤后ERK信号通路调节AQP4及其锚定蛋白DG的表达
目的：大鼠脑外伤（Traμmatic Brain Injμry ,TBI）及星形胶质细胞划伤后，通过对水通道蛋白-4 （ Aqμaporin-4 ， AQP4 ）以及肌萎缩蛋白（Dystroglycan，DG）表达变化规律的研究，探索AQP4的表达改变是否与DG有关，以及二者表达变化的调控机制。
方法：SD大鼠随机分组，根据自由落体法建立TBI组及假手术组。各组于术后6h、12h、24h、48h取材。通过伊文氏蓝(Evans Blμe，EB）检测血脑屏障（blood brain barrier, BBB）的损伤程度，IF、WB检测AQP4、α-DG、β-DG的蛋白表达变化，qRT-PCR检测三者mRNA的含量变化。为了排除TBI继发因素的干扰，明确TBI后星形胶质细胞中， AQP4与DG的表达变化关系及调控机制。用SD新生鼠进行原代星形胶质细胞培养，随机分组，建立划伤及假划伤对照组模型。于划伤或假划伤后6 h、24 h分别收取细胞，IF、WB、RT-PCR检测AQP4、α-DG、β-DG的蛋白及mRNA的表达变化；WB检测ERK信号通路的改变。为了明确ERK信号通路是否参与TBI后AQP4及DG的表达调控，随机将星形胶质细胞细胞分为对照组、抑制剂组与激动剂组，分别加入DMSO、μ0126、TPA预处理1 h后进行划伤，于划伤后6 h收取细胞。IF、WB、RT-PCR检测三组细胞中AQP4与α-DG、AQP4与β-DG的蛋白及mRNA的表达变化；WB检测ERK信号通路的改变。
结果：TBI后各时间段，AQP4、α、β-DG的表达变化规律虽基本一致，但由于 TBI 后继发的炎性反应及其它因素的干扰，使得 DG 与 AQP4的表达变化确实存在不一致的现象；但在纯化的星形胶质细胞中，划伤后DG与AQP4的表达改变与P-ERK的变化完全一致；干扰ERK信号通路后，导致DG与AQP4的表达发生相应的改变。
结论：TBI后，DG参与AQP4在星形胶质细胞的锚定，但并非AQP4极性表达的专属锚定蛋白；机械损伤后早期ERK信号通路激活，并参与DG及AQP4的表达调控。
目的：探讨微管蛋白折叠辅助因子B（Tubulinfolding cofactors B, TBCB）在胎儿酒精综合症（Fetal alcohol syndrome,FAS）发病机制中的作用。从 TBCB 对微管生物合成及动态平衡调节的角度入手，探讨FAS的发病机制。
方法：建立胎儿酒精综合症小鼠模型，在其发育过程中，通过行为学检测，明确其神经系统的损伤症状。用Nissl、Golgi 染色，检测P0新生小鼠大脑内神经元及树突棘数量、纤维轴突长度的变化；用透射电镜检测神经元胞体及纤维内部超微结构的改变；免疫荧光(Immμnofloμrescent,IF)、免疫印迹(Western Blot, WB)检测大脑内神经元标记物NeuN、树突标记物Map2、轴突标记物Smi、微管蛋白α-Tμblin及TBCB的表达变化，明确神经元、微管与TBCB的表达改变。定量逆转录PCR(Qμantitative Reverse Transcription PCR,qRT-PCR)检测TBCB的 mRNA 表达改变。
结果：与正常小鼠比较，FAS 新生鼠出生体重显著降低，解剖观察神经系统发育无明显异常。在其发育过程中，行为学检测显示，FAS 小鼠的本体感觉与运动协调能力的发育显著延迟，对新事物的探索能力降低，学习记忆能力明显下降。对新生鼠大脑神经元数量进行检测， Nissl、Golgi染色结果显示，FAS小鼠神经元数量与对照组无明显差异。对新生鼠大脑神经元胞体形态、结构进行检测，透射电镜发现FAS新生鼠大部分神经元的胞体、胞核的形态结构，以及细胞器的数量、形态结构均无明显异常。对新生鼠神经纤维形态结构进行检测，IF、WB显示FAS小鼠脑内轴突、树突标记物Smi、Map2的表达明显降低；电镜结果显示FAS新生鼠大脑皮质神经纤维纵切面内，平行排列的细长管状的微管结构几乎消失，核糖体、线粒体水肿并减少，但仍可见；横截面内微管空心圆状结构消失，呈现为絮状不规整结构。对新生鼠脑内TBCB及微管进行检测，IF显示二者在FAS新生鼠大脑运动区、杏仁核，以及丘脑的表达明显降低，WB显示二者在FAS新生鼠全脑的蛋白表达明显下降，qRT-PCR显示FAS新生鼠全脑内TBCB的mRNA下调。TBCB 与 α-tubulin 沿微管共表达，但共表达的区域及数量明显减少。
结论：TBCB在FAS新生鼠脑内表达下调，可能导致微管形态结构严重破坏，从而引起神经纤维病变，最终导致FAS小鼠神经发育障碍，表现出学习、记忆、感知、感觉能力的发育迟缓。
实验二 脑外伤后ERK信号通路调节AQP4及其锚定蛋白DG的表达
目的：大鼠脑外伤（Traμmatic Brain Injμry ,TBI）及星形胶质细胞划伤后，通过对水通道蛋白-4 （ Aqμaporin-4 ， AQP4 ）以及肌萎缩蛋白（Dystroglycan，DG）表达变化规律的研究，探索AQP4的表达改变是否与DG有关，以及二者表达变化的调控机制。
方法：SD大鼠随机分组，根据自由落体法建立TBI组及假手术组。各组于术后6h、12h、24h、48h取材。通过伊文氏蓝(Evans Blμe，EB）检测血脑屏障（blood brain barrier, BBB）的损伤程度，IF、WB检测AQP4、α-DG、β-DG的蛋白表达变化，qRT-PCR检测三者mRNA的含量变化。为了排除TBI继发因素的干扰，明确TBI后星形胶质细胞中， AQP4与DG的表达变化关系及调控机制。用SD新生鼠进行原代星形胶质细胞培养，随机分组，建立划伤及假划伤对照组模型。于划伤或假划伤后6 h、24 h分别收取细胞，IF、WB、RT-PCR检测AQP4、α-DG、β-DG的蛋白及mRNA的表达变化；WB检测ERK信号通路的改变。为了明确ERK信号通路是否参与TBI后AQP4及DG的表达调控，随机将星形胶质细胞细胞分为对照组、抑制剂组与激动剂组，分别加入DMSO、μ0126、TPA预处理1 h后进行划伤，于划伤后6 h收取细胞。IF、WB、RT-PCR检测三组细胞中AQP4与α-DG、AQP4与β-DG的蛋白及mRNA的表达变化；WB检测ERK信号通路的改变。
结果：TBI后各时间段，AQP4、α、β-DG的表达变化规律虽基本一致，但由于 TBI 后继发的炎性反应及其它因素的干扰，使得 DG 与 AQP4的表达变化确实存在不一致的现象；但在纯化的星形胶质细胞中，划伤后DG与AQP4的表达改变与P-ERK的变化完全一致；干扰ERK信号通路后，导致DG与AQP4的表达发生相应的改变。
结论：TBI后，DG参与AQP4在星形胶质细胞的锚定，但并非AQP4极性表达的专属锚定蛋白；机械损伤后早期ERK信号通路激活，并参与DG及AQP4的表达调控。