嗜热蛋白酶WF146是来源于嗜热菌Brev访acillus sp.WF146的一种丝氨酸蛋白酶,它属于枯草杆菌蛋白酶家族(subtilisin family)。前期实验结果表明,在酶原的C端加上、缺失或者是改变氨基酸残基之后会对其成熟酶的热稳定性产生不利的影响。为了研究蛋白酶WF146的C端对其生化性质的作用,我们构建了一系列在C端后带有不同“尾巴”的突变体。结果表明,无论C端“尾巴”的长短和种类,多余的C端“尾巴”都会造成热稳定性的下降。我们可以知道蛋白酶WF146的C端对于其耐高温的性质有着不可取代的作用,C端结构的改变和破坏可能会影响酶分子的整体结构,使其变得相对松散,从而对性质产生影响。同时,我们还发现C端“尾巴”会导致酶原在加工成熟的过程中速度减慢,我们推测可能是因为加工成熟过程中,酶原既要切除N端前肽,又要切除C端“尾巴”,这两者呈竞争关系,从而影响加工成熟的速度。另外,我们根据实验室前期筛选出的一些突变位点,对C端带有Leu-Glu-His6的蛋白酶WF146,即WF146-X-H,进行组合突变。在构建出的39个突变体中,有许多突变体的催化活性或者(和)热稳定性都要高于野生型和亲本型,如SH47、SH48、SH50、SH51和SH55等,这说明利用累加效应可以得到比天然酶性质更好的重组酶。我们还初步探究了嗜热蛋白酶WF146及其本实验室前期获得的突变体酶N63P/A66P和PBL5对角蛋白的降解能力,并与商品化的蛋白酶K的降解能力进行了比较。我们发现在50℃时,蛋白酶K对角蛋白的降解效果最好,WF146及其突变体的降解效果相互之间没有很大的差异;在80℃时,蛋白酶K很快失活,而嗜热酶N63P/A66P和PBL5仍然能够继续降解角蛋白,N63P/A66P处理角蛋白8h后就基本将其降解完全。另外,我们发现尽管突变体N63P/A66P的催化活性和热稳定性不如PBL5,但是其对角蛋白的降解能力却要高于后者,我们推测可能是该突变位点改变了酶对底物的特异性。我们将这个位点组合进PBL5中,构建出了 PBL5N,PBL5N在80℃的稳定性和PBL5相差无几,但是对角蛋白的降解能力要优于PBL5,和N63P/A66P相当,在处理角蛋白8h后,能够基本将其降解完全。本研究通过对嗜热蛋白酶WF146的C端与热稳定性相关性质进行了探究与分析,为嗜热酶的定向进化和工业应用提供了思路。