【摘 要】
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目的：构建可以用于缺血性脑血管病基因治疗的腺相关病毒载体rAAV-VEGF<,165>,并研究其在体内外的表达.方法：利用DNA重组技术,以VEGF<,165>取代XX <,2>-GFP中的gfp基因,构建AAV载体质粒XX <,2>-VEGF<,165>.用XX <,6>-80和XX <,2>-GFP/ XX <,2>- VEGF<,165>磷酸钙共转染rAAV包装细胞系HEK293,获得重组病毒载体rAAV-GFP/rAAV- VEGF<,165>,再经"氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"
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目的：构建可以用于缺血性脑血管病基因治疗的腺相关病毒载体rAAV-VEGF<,165>,并研究其在体内外的表达.方法：利用DNA重组技术,以VEGF<,165>取代XX <,2>-GFP中的gfp基因,构建AAV载体质粒XX <,2>-VEGF<,165>.用XX <,6>-80和XX <,2>-GFP/ XX <,2>- VEGF<,165>磷酸钙共转染rAAV包装细胞系HEK293,获得重组病毒载体rAAV-GFP/rAAV- VEGF<,165>,再经"氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"三步法纯化.将病毒载体体外转染293细胞、体内行大脑皮层内注射,研究其表达情况.结果：通过双质粒共转染293细胞,"氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"三步法纯化,可以得到高滴度的rAAV- VEGF<,165>,且可在体内外表达.结论：成功地构建了rAAV- GFP/rAAV-VEGF<,165>载体,初步研究了其在体内外的表达情况,为缺血性脑血管病的基因治疗打下了基础.
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