沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌和金黄色葡萄球菌是三种食源性致病菌,近年来,在我国引起多例食品中毒事件。三种致病菌通过传统的平板培养法检测存在耗时、易污染、操作繁琐等缺点,因此需要研究一种用于该三种致病菌的快速检测的方法。本研究调查了目前国际上生物传感器等领域的诸多新型检测技术,最终将ATP生物发光法与免疫磁分离技术作为主要研究手段与内容,并对其进行了较为深入的探讨和研究。研究内容一:通过不同的pH、温度和时间,探讨抗体与磁珠偶联的最优条件。通过正交试验比较氨基修饰磁珠与沙门氏菌抗体最佳反应条件的组合是为PH值9.6,温度37℃,反应时间为2h;与单核细胞增生李斯特菌抗体最佳反应条件的组合是为PH值9.6,温度37℃,反应时间为1.5h;与金黄色葡萄球菌抗体最佳反应条件的组合是为PH值9.6,温度37℃,反应时间为1h。沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌以及金黄色葡萄球菌磁珠的最佳使用量分别为80μL、100μL和60 μL。通过上述偶联条件的优化,最终获得了稳定的沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌和金黄色葡萄球菌免疫磁珠。研究内容二:以沙门氏菌为研究对象,优化ATP生物发光技术所需的最佳缓冲液以及筛选最佳发光化学物质。通过对 pH=7.4 条件下 Tris-HCl、Na2HPO4-C6H8O7、KH2PO4-NaOH、PBS四种缓冲液对发光反应的影响,试验结果证明Tris-HCl缓冲液稀释效果最好。再通过比较NaOH、NaCl、NaH2PO4、KCl、MgC12五种同质量浓度的化学物质对发光反应的影响,试验结果发现MgCl2对发光有显著的增强作用,其它四种化学物质则对发光产生了一定的抑制作用,其抑制作用强弱顺序为:NaOH、NaCl、NaH2PO4、KCl。研究内容三:通过对免疫磁珠富集沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌和金黄色葡萄球菌条件的优化以及ATP发光技术的检测,建立沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌和金黄色葡萄球菌免疫磁珠联合ATP发光技术,并对模拟污染样品进行检测。结果:(1)比较了不同的菌体-免疫磁珠浓度配比1:6.34、1:12.69、1:25.38、1:38.66下的免疫磁分离技术的捕获率,结果表明当菌体-IMB浓度配比为1:30时,沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌的捕获率近100%。当菌体-IMB浓度配比为1:25时,金黄色葡萄球菌的捕获率近100%。(2)在总体积0.4 mL不变、IMB的加入量不变的情况下,比较了 3种待测细菌和Bacillus Subtilis在不同的体积比下的捕获率,均出现捕获率先下降后上升的情况。(3)免疫磁分离技术联合ATP生物发光法技术来检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌和金黄色葡萄球菌,这种联用技术与传统的细菌培养方法有良好的线性相关性,相关系数分别为R2=0.99762,P<0.0001;R2=0.9866,P<0.0001;R2=0.9911,P<0.0001,检测限可低达 102CFU/mL。(4)运用所建立的免疫磁珠捕获联合ATP发光的方法检测模拟样本中的待捕获细菌,结果显示原浓度为107、106、105、104、103和102CFU/mL的3种细菌模拟样本,ATP发光检测分别接近为 108、107、106、105、104 和 103 CFU/mL。