【摘 要】
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背景和目的随着口腔种植区骨量不足病例应用各种骨移植材料的研究越来越多,特别是牙骨移植材料在口腔种植领域的研究和应用日益成为研究的热点,而块状骨移植材料在口腔种植区垂直骨高度的修复与重建中发挥着重要作用,本实验探究经复合酸真空超声处理的块状脱矿牙骨移植材料诱导小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的成骨效果,并比较与成品试剂联合真空超声处理的脱矿处理后的块状牙骨移植材料对小鼠MC3T3-E1成骨效果差异。方
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背景和目的随着口腔种植区骨量不足病例应用各种骨移植材料的研究越来越多,特别是牙骨移植材料在口腔种植领域的研究和应用日益成为研究的热点,而块状骨移植材料在口腔种植区垂直骨高度的修复与重建中发挥着重要作用,本实验探究经复合酸真空超声处理的块状脱矿牙骨移植材料诱导小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的成骨效果,并比较与成品试剂联合真空超声处理的脱矿处理后的块状牙骨移植材料对小鼠MC3T3-E1成骨效果差异。方法收集人新鲜离体牙,经高速手机喷水下磨制成6.5x6.5x1.5mm大小的块状牙体组织,实验分成3组:A组为复合酸真空超声处理的块状牙骨移植材料,B组为未处理组块状牙骨移植材料,C组为成品试剂真空超声处理的牙骨移植材料。检测细胞粘附、增殖和分化情况。扫描电镜观察3组不同处理的块状牙骨移植材料的表面形貌及MC3T3-E1细胞在上述3组支架材料表面的粘附情况;分别将各组材料与细胞共培养24小时,Phalloidin和DAPI进行细胞染色,单光子共聚焦显微镜下观察每组材料上细胞骨架蛋白染色及细胞数量;按50mg牙骨移植材料制取1m L浸提液的浓度制备各组浸提液,用MTT法检测细胞培养1、3、5、7天的增殖;浸提液培养MC3T3-E1细胞3天后,免疫荧光检测BMP-7蛋白的表达;牙骨移植材料与MC3T3-E1共培养3,7,14天后检测ALP活性;共培养14,21天后进行茜素红染色检测钙结节面积;共培养7天后应用Western Blot检测BMP-2,OCN蛋白的表达。结果扫描电镜结果表明,3组均可见有多孔结构,A、C组牙本质小管完全打开,MC3T3-E1细胞能粘附在三组牙骨移植材料表面,并且在A组支架材料上细胞伸展良好,可见微丝间有良好的接触形成网状结构;共聚焦显微镜下,A组支架上细胞骨架较完整,肌动蛋白拉伸较B、C组均明显;共聚焦显微镜下,A、B、C组支架材料上吸附细胞数分别为11.67±1.53、2.00±1.00、7.30±0.58,A、B、C组间均有显著性差异(P<0.05);MTT法检测C组浸提液培养5天、7天的吸光度值(A492nm)明显高于A、B两组(P<0.05),A组与C组的吸光度值3天到7天差异均有显著性;ALP活性实验显示在7天和14天时A、C组碱性磷酸酶活性显著高于B组(P<0.05),但A组和C组无统计学差异;免疫荧光实验显示,A、C组BMP-7绿色荧光颗粒比B组强;Western Blot实验结果显示,BMP-2蛋白表达在A、B、C三组间无显著差异,OCN蛋白表达为A、C组明显高于B组;且A组和C组茜素红染色面积均高于B组(P<0.05),且A组高于C组(P<0.05)。结论1、复合酸联合超声处理的块状牙骨移植材料具有良好的生物相容性,能够促进小鼠颅顶前成骨细胞MC3T3-E1的黏附和增殖。2、复合酸处理的块状牙骨移植材料能达到成品试剂处理的块状牙骨移植材料相似的结果。复合酸处理组牙骨移植材料具有更好的细胞吸附性,显示了更好的骨传导性;复合酸联合超声处理的人块状牙骨移植材料能作为一种可供选择的处理方法。
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