垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)是促胰液素/胰高血糖素家族的成员,它在脊椎动物的中枢神经系统和外周组织中发挥着多种生理功能。PACAP能有效地促进鱼类生长激素(Growth hormone,GH)和促性腺激素(Gonadotropin,GTH)的分泌,进而调节鱼类的生长和生殖。近年来,PACAP38作为新型生长激素释放因子(growth hormone-releasing factor,GRF)在鱼类研究中受到越来越多的关注。本研究旨在建立大规模制备低成本、高活性的草鱼PACAP38的方法。根据大肠杆菌密码偏好性设计了3条寡核苷酸片段,并用两步PCR的方法合成草鱼PACAP38的开放性阅读框(open reading frame,ORF),分别克隆至pThioHis A和pET32a(+)载体,构建Top10-pThioHisA-PACAP38、BL21(DE3)-pThioHisA-PACAP38和BL21(DE3)-pET32a(+)-PACAP38三种表达系统,其中BL21(DE3)-pET32a(+)-PACAP38为最佳表达系统。用该表达系统大规模制备的Thioredoxin-PACAP38(Trx-PACAP38)融合蛋白85％以上为可溶性蛋白,融合蛋白占可溶性总蛋白的36%;1LE.coliBL21(DE3)菌液中含有123mgTrx-PACAP38融合蛋白,经Ni2+亲和层析柱纯化获得99mg97%纯度的Trx-PACAP38融合蛋白。与融合伴侣对照组相比较,纯化得到的Trx-PACAP38融合蛋白能特异性抑制T98G人胶质瘤细胞的增殖,而PACAP抗体能中和该效应,证明重组草鱼PACAP38具有抑制肿瘤细胞增殖的生物学活性。本研究成功建立了一种表达和纯化重组草鱼PACAP38的方法,可以为一些重要小肽的生产提供借鉴。纯化获得的重组草鱼PACAP38不仅有助于鱼类养殖,而且有助于鱼类生长与生殖功能的基础性研究。