人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是乳多空病毒的一种,生殖道HPV感染是当今流行最广的性传播疾病之一。HPV在临床上主要引起尖锐湿疣和宫颈癌等疾病,它的型别繁多,现已发现200多个,根据其致病力的大小分为低危型和高危型。前者包括HPV6,11,30,9等,主要导致生殖道乳头状瘤,尖锐湿疣,外生性湿疣类病变,低度子宫颈上皮内瘤变等。后者包括HPV16,18,31,33,35等,主要导致高度子宫颈上皮内瘤变和子宫颈癌的发生。根据研究发现子宫颈癌的发生与HPV的感染密切相关,90%以上的宫颈癌组织中可以检测到HPV,其中HPV16的检测率超过50%。所以可以说,HPV特别是HPV16是引起宫颈癌的主要因素。 近来有一种新的给药方式,它利用在显微镜下才看得见的针组成的微针阵列(microneedle array,简称微针,)在皮肤上产生许多微米级的通道。这些通道可以让大分子物质通过,甚至一些超分子化合物和微粒也能通过。微针仅穿透对药物扩散起屏障作用的皮肤角质层(15～25μm),并打通上百个给药通道,药物可经通道迅速扩散到毛细血管进入体循环。而且微针透皮给药方便,无明显创伤,病人痛苦小,可减少副作用,同时设备操作简单,价格便宜。作为抵御外界病源的第一道屏障,皮肤系统的免疫功能十分发达,能否通过透皮免疫引起有效的免疫反应,以建立一种新型的免疫途径,正是我们的研究目的。 本文构建了HPV16E7—pcDNA3.1(-)重组质粒,并以之作为DNA疫苗。在体外透皮的条件下,我们观察了30个小时,试验结果发现DNA疫苗可以透过皮肤,而且透过量随着时间的延长而逐步增加,透过量也比较大,在第30h时可以达到0.74mg/cm~2。再结合微针给药的方式将该DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,每两周免疫一次,共给药三次,每次免疫剂量为200μg/只,阴性对照组用等体积生理盐水代替。最后一次免疫后两周采血,分别分离血清和淋巴细胞,用间接免疫荧光试验检测小鼠的体液免疫功能,用淋巴细胞转化实验来检测小鼠的细胞免疫功能。实验结果表明,微针免疫DNA疫苗可以诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫。 本文通过HPV16 E7的DNA疫苗的研制为HPV的治疗寻找一种有效的方法,同