陆英的化学成分和质量控制方法研究

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:qianjun0412064
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陆英为忍冬科接骨木属植物陆英Sambucus chinensis Lindl.的干燥全草,为民间常用中药。本研究以陆英为研究对象,对其化学成分、质量控制方法、提取物的工艺优化和相关成分的药动学进行了研究。采用液-液萃取法、大孔吸附树脂法和各种色谱分离技术对陆英的化学结构进行了系统研究。共分离得到23个化合物,通过色谱法、理化性质、光谱数据分析鉴定了其中17个化合物,分别为Kaempferol(1), Kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside(2), Kaempferol-3-O-β-D-glu copyranoside(3), Kaempferol-3-O-(6"-acetyl)-β-D-galactopyranoside(4), Kaempferol-7-O-β-D-glu copyranoside-3-O-(6"-acetyl)-β-D-glucopyranoside(5),2-hydroxy-3-methyl anthraxquinone(6), Ferulic acid(7), Ethylferulate(8), Caffeic acid(9),Ethyl caffeate(10), P-coumaric acid(11), Ch-lorogenic acid(12), Ursolic Acid(13), Oleanolic acid(14), Syringaresinol(15),β-sitosterol(16), Daucosterol(17),其中化合物1,2,3,4,6,7,8,9,11,15,17为首次从该植物中分离得到的成分,为陆英的质量控制和药动学研究提供了物质基础。采用HPLC法对陆英中主要化学成分进行了定量分析,并建立了评价陆英质量的指纹图谱。采用梯度洗脱方式,建立了同时测定陆英中7个活性成分和同时测定陆英中4种有机酸的HPLC分析方法,对色谱条件、药材提取方法进行了优化,经方法学验证,符合含量测定的要求。采用等度洗脱方式,建立了测定陆英中山柰酚含量的HPLC分析方法。本研究建立的分析方法简单、快速、准确,并成功地应用于不同来源陆英中主要化学成分的含量测定。采用HPLC法,对6批不同来源的陆英进行指纹图谱研究,以绿原酸为参照物,确立了陆英中的23个共有峰,通过与对照品对照,指认了其中8个色谱峰;建立了共有模式,计算待测样品与共有模式指纹图谱之间的相似度,根据相似度计算结果,对药材质量进行了评价。利用陆英HPLC指纹图谱的色谱条件,对陆英不同提取溶剂和方法所得到的提取液(包括陆英水提取液、75%乙醇提取液、乙酸乙酯提取物的醇溶液和大孔树脂柱的30%乙醇洗脱液)进行指纹图谱分析,通过图谱比较,初步确定主要抗肝炎有效成分为有机酸类和黄酮类成分。以绿原酸和总黄酮为指标,对不同类型的大孔吸附树脂进行了筛选;以总黄酮为指标,系统地考察了洗脱溶剂浓度、上样量、上样药液的pH值、洗脱剂的pH值和加盐前后对陆英有效成分含量的影响,对优化工艺进行了初步验证。该工艺为陆英有效部位的提取提供了实验依据。建立了测定大鼠血浆中阿魏酸含量的UPLC-MS/MS分析方法,以多西他赛(docetaxel)为内标,血浆经甲酸酸化后,以乙醚为提取溶剂进行液-液萃取,采用电喷雾电离源(ESI源),在多反应离子监测(MRM)方式下进行分析,结果表明:在此条件下空白血浆中内源性物质不干扰阿魏酸与内标的测定,阿魏酸在0.50-800 ng·mL-1范围内线性关系良好,精密度、准确度、稳定性和提取回收率均符合要求。采用所建立的方法测定了大鼠静脉注射阿魏酸单体、灌胃给予阿魏酸单体和陆英提取物后阿魏酸在大鼠血浆中的血药浓度,考察了给药后阿魏酸在大鼠体内的药动学行为,结果表明:静脉注射阿魏酸单体、灌胃给予阿魏酸单体和陆英提取物后,峰浓度Cmax分别为948±73 ng·mL-1,602.4±111.8 ng·mL-1,245.2±123.2 ng·mL-1,半衰期t1/2分别为1.65±0.53,2.59±0.44,2.81±0.88,AUC0-t分别为123.1±12.2 ng·h·mL-1,129.8±28.4ng·h·mL-1,295.4±50.8 ng·h·mL-1,AUC0-∞分别为128.4±8.93 ng·h·mL-1,144.5±27.4 ng·h·mL-1,513.0±124.5 ng·h·mL-1。本研究在中医药学理论和实践指导下,将中药学、分析化学、生物药剂学、化学统计学和计算机技术相结合,对陆英的化学成分进行了系统分离,建立了药材的质量控制方法,优化了其有效部位的提取工艺,建立了其相关成分在生物样品中的分析方法,并对其药物动力学进行了研究,对中药材的质量控制、药效物质基础和药物动力学研究进行了有意义的探索。
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